[發明專利]一種密碼子優化的沙眼衣原體ctl0286基因及其應用

有效

• 申請號: 202110591839.7
• 申請日: 2021-05-28
• 公開（公告）號: CN113373163B
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發明（設計）人: 包小峰;陸春風;孫邈;劉書龍;謝文霞;姜和
• 申請（專利權）人: 南通大學
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12N15/70;C07K14/295;C07K16/12;C07K16/06;G01N33/569;A61K38/16;A61P27/02;C12R1/19
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 黃欣

本發明公開了一種密碼子優化的沙眼衣原體ctl0286基因及其應用，屬于生物醫藥技術領域。所述密碼子優化的沙眼衣原體ctl0286基因，其序列如SEQ ID NO.1所示。本發明通過密碼子優化策略，實現了大腸桿菌系統中不能表達的沙眼衣原體蛋白CTL0286的體外表達，使用表達蛋白制備的抗體可用于CTL0286蛋白的鑒定；作為沙眼衣原體中未知功能的特有蛋白，本發明可為CTL0286蛋白的功能研究和抗體開發提供基礎，進而為臨床衣原體治療和鑒定提供新靶點和藥物。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種密碼子優化的沙眼衣原體ctl0286基因及其應用。

背景技術

眾所周知，基因轉錄離不開RNA聚合酶的參與，衣原體RNA聚合酶(cRNAP)核心酶中的α、β、β′亞基的同源物均已找到，但直到目前為止，衣原體中是否存在ω因子的功能類似物仍未能得到證實。

衣原體啟動子體外轉錄活性的測定，經常借用大腸桿菌RNA聚合酶(eRNAP)來模擬cRNAP，由此發明人推測衣原體中假如存在ω因子功能類似物的話，那么它與eRNAP的ω因子的同源性應該是相對較高的。

發明人從E.coli K-12菌株MG1655的ω蛋白序列出發，經多步驟Blast搜索Chlamydiae(taxid:204428)數據庫，最終發現了沙眼衣原體L2(Ct L2)中潛在的ω因子功能類似物CTL0286。CTL0286是一個迄今為止仍未被研究過的衣原體蛋白，在研究該蛋白的功能之前，需要體外表達得到這個蛋白。

由于ctl0286基因中含有9個E.coli中的aga精氨酸稀有密碼子(占ctl0286密碼子總數的9％)，導致其蛋白不能在E.coli系統中表達。為此，發明人嘗試對ctl0286基因的密碼子進行全面優化，構建E.coli中的表達質粒并成功誘導表達CTL0286蛋白。

發明內容

本發明的目的是提供一種密碼子優化的沙眼衣原體ctl0286基因，該ctl0286基因可成功表達CTL0286蛋白，同時，CTL0286蛋白作為衣原體特有的蛋白，后續針對該蛋白的抗體研究可為臨床衣原體鑒定提供新思路。

為了實現上述發明目的，本發明采用以下技術方案：

一種密碼子優化的沙眼衣原體ctl0286基因，其序列如SEQ ID NO.1所示。

一種表達載體，包含上述沙眼衣原體ctl0286基因。

進一步地，所述表達載體為pET28a載體或者pET21c載體。

一種沙眼衣原體CTL0286蛋白的表達方法，包括如下步驟：

(1)合成上述沙眼衣原體ctl0286基因；

(2)構建含有所述沙眼衣原體ctl0286基因的表達載體：

具體地，將所述沙眼衣原體ctl0286基因連接至pET28a載體或者pET21c載體的NdeI/XhoI位點，轉化大腸桿菌DH5α感受態細胞，在相應抗性的LB平板上進行抗性篩選，經PCR鑒定，即可得到表達載體；

(3)將所述表達載體轉化宿主細胞、表達：

具體地，將重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3)化學感受態細胞，涂布于相應抗性的LB平板上培養，挑取平板中生長良好的菌落接種于含有相應抗生素的LB液體培養基中培養，然后將培養的菌液接種至不含抗生素的LB液體培養基中，培養至OD₆₀₀＝0.6-0.8，加入終濃度為1mM的IPTG，繼續振搖培養。

本發明通過對ctl0286基因密碼子的全面優化，可以高表達地獲得CTL0286蛋白，可實現CTL0286蛋白功能的研究，也可用于CTL0286抗體的制備。