[發明專利]納米顆粒調配物

在審

• 申請號: 202110591213.6
• 申請日: 2017-12-01
• 公開（公告）號: CN113307858A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: Y·里菲利;B·C·特納;G·A·伯德
• 申請（專利權）人: 泰加生物工藝學公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K14/705;C07K14/725;C07K14/73;C07K14/82
• 代理公司: 北京律盟知識產權代理有限責任公司 11287
• 代理人: 蔣林清

1.一種制備包括一或多種含MYC多肽的生物活性納米顆粒群的方法，所述方法包括：

(a)使含MYC多肽在包括某一濃度的變性劑的增溶溶液中增溶以提供增溶的含MYC多肽；

(b)用第一重折疊緩沖液對所述增溶的含MYC多肽進行第一重折疊步驟至少約30到180分鐘以提供第一多肽混合物，所述第一重折疊緩沖液包括約0.35到約0.65濃度的步驟(a)的所述變性劑和約100mM到約1M堿金屬鹽和/或堿性金屬鹽；

(c)用第二重折疊緩沖液對所述第一多肽混合物進行第二重折疊步驟至少約30到180分鐘以提供第二多肽混合物，所述第二重折疊緩沖液包括約0.10到約0.30濃度的步驟(b)的所述變性劑和約100mM到1M堿金屬鹽和/或堿性金屬鹽；和

(d)用第三重折疊緩沖液對所述第二多肽混合物進行第三重折疊步驟至少約30到180分鐘，所述第三重折疊緩沖液包括約100mM到1M堿金屬鹽和/或堿性金屬鹽；

(e)將所述含MYC多肽保持在所述第三重折疊緩沖液中一段時間，所述時間足以產生數均直徑介于約80nm和約150nm之間的生物活性納米顆粒，

其中相較于未與所述生物活性納米顆粒接觸的抗CD3或抗CD28活化的T細胞，在適合T細胞增殖的條件下使抗CD3或抗CD28活化的T細胞與所述生物活性納米顆粒接觸增強了所述T細胞的活化、存活或增殖中的一或多種。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述第一重折疊步驟、第二重折疊步驟和/或第三重折疊步驟包括通過緩沖液更換來進行所述步驟。

3.根據權利要求2所述的方法，其中使用切向流過濾進行緩沖液更換。

4.根據權利要求1所述的方法，其中所述堿金屬鹽包括鈉鹽、鋰鹽和鉀鹽中的一或多種，其中所述鈉鹽包括氯化鈉(NaCl)、溴化鈉、硫酸氫鈉、硫酸鈉、碳酸氫鈉或碳酸鈉中的一或多種，其中所述鋰鹽包括氯化鋰、溴化鋰、硫酸氫鋰、硫酸鋰、碳酸氫鋰或碳酸鋰中的一或多種，以及其中所述鉀鹽包括氯化鉀、溴化鉀、硫酸氫鉀、硫酸鉀、碳酸氫鉀或碳酸鉀中的一或多種。

5.根據權利要求1所述的方法，其中所述堿金屬鹽包括鎂鹽和鈣鹽中的一或多種，其中所述鎂鹽包括氯化鎂、溴化鎂、硫酸氫鎂、硫酸鎂、碳酸氫鎂或碳酸鎂中的一或多種，以及其中所述鈣鹽包括氯化鈣、溴化鈣、硫酸氫鈣、硫酸鈣、碳酸氫鈣或碳酸鈣中的一或多種。

6.根據權利要求1所述的方法，其中所述堿金屬鹽包括NaCl且所述第一、第二和/或第三重折疊緩沖液包括約500mM NaCl。

7.根據權利要求1所述的方法，其中步驟(a)中的變性劑的濃度為約1M到約10M，其中所述變性劑包括胍、鹽酸胍、氯化胍、硫氰酸胍、尿素、硫脲、高氯酸鋰、氯化鎂、苯酚、甜菜堿、肌氨酸、氨基甲酰肌氨酸、?；撬?、二甲亞砜(DMSO)；醇；洗滌劑；氫氧化物中的一或多種。

8.根據權利要求1所述的方法，其中所述第一重折疊緩沖液、所述第二重折疊緩沖液和/或第三重折疊緩沖液各自獨立地包括緩沖劑，其中所述緩沖劑包括TRIS(三[羥甲基]氨基甲烷)、HEPPS(N-[2-羥乙基]哌嗪-N'-[3-丙烷-磺酸])、CAP SO(3-[環己基氨基]-2-羥基-1-丙磺酸)、AMP(2-氨基-2-甲基-1-丙醇)、CAPS(3-[環己基氨基]-1-丙磺酸)、CHES(2-[N-環己基氨基]乙磺酸)、精氨酸、賴氨酸和硼酸鈉中的一或多種。

9.根據權利要求8所述的方法，其中每種緩沖劑獨立地以約1mM到約1M的濃度存在。

10.根據權利要求1所述的方法，其中所述第一重折疊緩沖液、第二重折疊緩沖液和/或第三重折疊緩沖液各自獨立地包括氧化劑和還原劑，其中氧化劑與還原劑的摩爾比為約2:1到約20:1，其中所述氧化劑是以約0.1mM到約10mM的濃度包括在內，且其中所述還原劑是以約0.02mM到約2mM的濃度包括在內。