[發(fā)明專利]基于二硫化鉬/納米鉑包金三角/聚多巴胺的前列腺癌腫瘤標志物檢測方法

有效

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• 申請日: 2021-05-28
• 公開（公告）號: CN113447547B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發(fā)明（設計）人: 李爽;張嘉偉;明東
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/48
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 王麗

1.一種基于二硫化鉬/納米鉑包金三角/聚多巴胺的前列腺癌腫瘤標志物檢測方法，其特征是，包括以下步驟：

1)在絲網印刷雙通道電極的兩個碳工作電極上修飾復合金屬納米材料：

(1)二硫化鉬層修飾：將二硫化鉬溶液滴加在清洗過的碳工作電極表面，在60-80℃條件下加熱30-60分鐘；

(2)納米鉑包金三角層修飾：將金三角溶液、硝酸銀、抗壞血酸和去離子水加入反應瓶中，并在65-75℃條件下水浴20-25分鐘，然后加入氯鉑酸溶液，并將混合溶液放置過夜，得到納米鉑包金三角溶液；將制備的納米鉑包金三角滴加在修飾二硫化鉬層工作電極表面，在60-80℃條件下加熱30-60分鐘；

(3)聚多巴胺層電聚合：中性pH條件下，在修飾有二硫化鉬以及納米鉑包金三角的電極表面滴加多巴胺溶液，采用電化學循環(huán)伏安法在電極表面電聚合形成聚多巴胺膜層，形成修飾復合金屬納米材料電極；

2)在步驟(1)生成的修飾復合金屬納米材料電極上進一步修飾對兩類前列腺癌腫瘤標志物特異性敏感生物分子，并將電極用于對兩類前列腺腫瘤標志物進行檢測，具體包括以下兩個子步驟：

(1)兩類特異性敏感生物分子修飾：對生成的修飾復合金屬納米材料電極進行進一步修飾，在雙通道電極的兩側工作電極分別滴加識別游離前列腺特異性抗原的特異性抗體溶液以及識別總前列腺特異性抗原的特異性抗體溶液，并將電極在室溫下靜置2-4小時后完成兩類特異性抗體物理吸附過程；

(2)兩類前列腺腫瘤標志物檢測：對修飾形成的雙通道電極采用差分脈沖伏安法進行游離前列腺特異性抗原、總前列腺特異性抗原濃度的檢測。

2.如權利要求1所述的方法，其特征是，二硫化鉬層修飾是：將二硫化鉬粉末溶于去離子水，制成濃度1mg/mL的二硫化鉬溶液，修飾完成后使用大量去離子水緩慢沖洗電極表面并氮氣吹干。

3.如權利要求1所述的方法，其特征是，納米鉑包金三角層修飾是：反應過程硝酸銀濃度2mM、抗壞血酸濃度10mM，體積比為金三角溶液：硝酸銀：抗壞血酸：去離子水＝1:0.02:0.2:9；后加入的氯鉑酸溶液濃度1mM，體積比為氯鉑酸：硝酸銀＝2:1，修飾完成后使用大量去離子水緩慢沖洗電極表面并氮氣吹干。

4.如權利要求1所述的方法，其特征是，聚多巴胺層電聚合是：將鹽酸多巴胺與磷酸鹽緩沖液在中性pH條件下混合震蕩，制成濃度1mg/mL多巴胺溶液；將多巴胺溶液滴加到電極表面，使用循環(huán)伏安法掃描；實現聚多巴胺電聚合法修飾，聚合完成后使用去離子水沖洗電極表面并氮氣吹干，形成表面自組裝法修飾復合金屬納米材料的電極。

5.如權利要求4所述的方法，其特征是，循環(huán)伏安法掃描參數是掃描電壓：-0.5V-0.5V，掃描步徑：20mV/s，掃描圈數：10。

6.如權利要求1所述的方法，其特征是，兩類特異性敏感生物分子修飾是：將游離前列腺特異性抗原的特異性抗體、總前列腺特異性抗原的特異性抗體使用中性pH條件下磷酸鹽緩沖液稀釋，制成濃度1μg/mL的特異性抗體前溶液；修飾完成后使用去離子水沖洗電極表面并氮氣吹干，完成生物敏感分子與復合金屬納米材料的連接，形成對游離前列腺特異性抗原與總前列腺特異性抗原均敏感的生物分子修飾電極。

7.如權利要求1所述的方法，其特征是，兩類前列腺腫瘤標志物檢測是：利用差分脈沖伏安法，對不同濃度的游離前列腺特異性抗原、總前列腺特異性抗原標準溶液以及空白對照組人工血清進行電化學檢測，獲得檢測不同濃度標準溶液所得到的差分脈沖伏安法電流峰值，以及相同條件下對人工血清檢測所得到電流峰值，二者求差并取絕對值得到電流的相對變化值；將標準溶液濃度對數與電流的相對變化值進行擬合，得到濃度擬合曲線，由于傳感器在擬合曲線相應濃度范圍內電流將隨對應的前列腺腫瘤特異性抗原濃度而發(fā)生線性變化；通過對照檢測目標前列腺腫瘤標志物得到的電流值和濃度擬合曲線，即可計算得到該檢測目標的相應濃度，進而完成了前列腺癌癥的檢測。

8.如權利要求7所述的方法，其特征是，差分脈沖伏安法是，參數為掃描電壓：-0.7V-0.4V，電壓增幅：5mV，電壓幅值：50mV，脈沖寬度：0.05V，采樣帶寬：0.0167s，脈沖周期：0.5s。