[發明專利]用于鑒定甜瓜抗細菌性果斑病性狀的Indel分子標記及方法

有效

• 申請號: 202110584844.5
• 申請日: 2021-05-27
• 公開（公告）號: CN113186335B
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 盧霞;阿門;樊文義;鄧志軍;滕錄華;許光利;李文虎
• 申請（專利權）人: 江蘇綠港現代農業發展股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 宿遷市永泰睿博知識產權代理事務所(普通合伙) 32264
• 代理人: 陳臣

1.一種用于鑒定甜瓜抗細菌性果斑病性狀的Indel分子標記,其特征在于,所述分子標記包括引物MIndel89的上游引物MIndel89-F和下游引物MIndel89-R，所述上游引物MIndel89-F的序列如SEQ?ID?NO.1?所示，所述下游引物MIndel89-R的序列如SEQ?IDNO.2所示,所述分子標記對抗果斑病的甜瓜材料M17050-5-1擴增片段測序的核苷酸序列為SEQIDNO.3，所述分子標記對感果斑病的甜瓜材料28-1-2-1-1擴增片段測序的核苷酸序列為SEQ?IDNO.4。

2.一種用于鑒定甜瓜抗細菌性果斑病性狀的方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)提取甜瓜的基因組DNA,?瓊脂糖凝膠電泳和分光光度計檢測DNA的質量與濃度;

(2)采用權利要求1所述的Indel分子標記對提取的甜瓜基因組DNA進行PCR擴增；

(3)在8％聚丙烯酰胺凝膠電泳上分離步驟（2）中的PCR擴增的片段；

(4)對步驟(3)電泳的產物進行銀染，并在白光下顯現。

3.根據權利要求2所述的用于鑒定甜瓜抗細菌性果斑病性狀的方法，其特征在于：所述步驟（2）中，PCR擴增的反應體系為15μL，包括7.5μL?2×Taq?MasterMix，1μLDNA提取物，10μM的正反向引物各1μL，4.5μLddH2O。

4.根據權利要求2所述的用于鑒定甜瓜抗細菌性果斑病性狀的方法，其特征在于：

所述步驟（2）中，PCR擴增的反應程序為94℃預變性2min，35個循環，?72℃延伸2min，然后反應保持在4℃。

5.根據權利要求4所述的用于鑒定甜瓜抗細菌性果斑病性狀的方法，其特征在于：所述94℃預變性2min具體為包括94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s。