[發(fā)明專利]一種氣凝膠固定化的微生物保藏方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110583444.2
• 申請日: 2021-05-27
• 公開（公告）號: CN113234712B
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發(fā)明（設計）人: 陳慶國;劉雨薇;劉梅;汪濤;竺柏康
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10;C12N11/084;C12N11/04;C12N1/04
• 代理公司: 北京國翰知識產權代理事務所(普通合伙) 11696
• 代理人: 李笑磊

1. 一種海藻酸鈉衍生物在氣凝膠固定化微生物保藏中的應用，包括：

提高氣凝膠對微生物的包埋率；和/或

提高微生物的存活率；

所述海藻酸鈉衍生物由質量比為1:0.28～0.35的海藻酸鈉、氧化海藻酸鈉在碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺的催化下，與5-羥基-色氨酸反應制得，所述5-羥基-色氨酸的添加量為海藻酸鈉、氧化海藻酸鈉總質量的1～5倍。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述氧化海藻酸鈉經由下述方法制備得到：

將海藻酸鈉溶于水中配置成質量分數為2～5%的海藻酸鈉水溶液，調節(jié)pH至3～4，加入高錳酸鉀溶液、醋酸/酒石酸混合溶液、無水乙醇，避光反應8～16h后，加入乙二醇終止氧化反應，接著加入氯化鈉充分混合，然后加入足量乙醇沉淀、抽濾后沉淀用去離子水溶解，重復乙醇沉淀、抽濾、溶解步驟2～3次，真空干燥得氧化海藻酸鈉。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述高錳酸鉀溶液的質量分數為3～5％，添加量為海藻酸鈉質量的0.8～1倍。

4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述醋酸/酒石酸混合溶液中醋酸的質量分數為4～6％、酒石酸的質量分數為5～8％，醋酸/酒石酸混合溶液的添加量為海藻酸鈉質量的1～1.2倍。

5.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺的總添加量為海藻酸鈉、氧化海藻酸鈉總質量的0.5～1倍，兩者的質量比為1:0.8～1.2。

6.一種氣凝膠固定化的微生物保藏方法，其特征在于，包括利用微生物保藏用氣凝膠作為固定化載體對微生物包埋后進行保藏，所述微生物保藏用氣凝膠包括權利要求1～5任一項中所述的海藻酸鈉衍生物。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述微生物保藏用氣凝膠包括：

基材，包含聚乙烯醇、海藻酸鈉衍生物；

保護劑，包含海藻糖、蔗糖、谷氨酸鈉；以及

添加劑，包含抗壞血酸鈉和咖啡酰酒石酸的混合物、引發(fā)劑、催化劑；其中，

抗壞血酸鈉和咖啡酰酒石酸的混合物中兩者的質量比為1:0.4～0.6，所述引發(fā)劑為過氧化二苯甲酰或過硫酸銨，催化劑為四甲基乙二胺。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

1)將原料混合制得氣凝膠混合液，并滅菌處理；

2)將待保藏的菌種制成懸浮液，菌液濃度高于10⁸CFU/mL；

3)將氣凝膠混合液與懸浮液按照質量比1:6～10混合均勻，通過物理擠壓方式滴入交聯劑中制成球狀物，冷凍干燥；

4)用聚氯乙烯塑料袋真空包裝，常溫保藏。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述氣凝膠混合液的具體制備步驟為：

分別將聚乙烯醇、海藻酸鈉衍生物溶于去離子水中配置成質量分數為8～12%、2～4%的溶液，然后將兩種溶液按照混合，超聲10～30min后，加入添加劑、保護劑，攪拌均勻后，靜置脫泡，制得氣凝膠混合液。