[發明專利]一種適合黃群藻生長的DY-IV培養基和制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202110583419.4
• 申請日: 2021-05-27
• 公開（公告）號: CN113186103A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 郝俊雪;馮佳;謝樹蓮
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 雷立康

1.一種適合黃群藻生長的DY-IV培養基，其特征在于，它由下列濃度的組分配制而成：CaCl₂·2H₂O 0.018-0.022g/L，MgSO₄·7H₂O 0.072-0.076g/L，Na₂HPO₄0.0064-0.0068g/L，NaNO₃ 0.018-0.022g/L，Na₂SiO₃·9H₂O 0.013-0.017g/L，NH₄NO₃ 0.008-0.012g/L，KCl0.008-0.012g/L，NH₄Cl 0.008-0.012g/L，MES Buffer 0.23-0.27g/L，金屬溶液1.0mL/L，維生素B₁₂溶液20.0μL/L，維生素B₇溶液20.0μL/L，維生素B₁溶液200μL/L；

所述的金屬溶液的組分及其含量為：Na₂·EDTA 7.8-8.2g/L，FeCl₃ 0.68-0.72g/L，MnCl₂ 0.18-0.22g/L，ZnSO₄ 0.038-0.042g/L，CoCl₂ 0.0078-0.0082g/L，Na₂MoO₄ 0.018-0.022g/L，H₃BO₃ 0.78-0.82g/L。

2.根據權利要求1所述的一種適合黃群藻生長的DY-IV培養基，其特征在于：所述的維生素B₁₂溶液通過如下方法制得：于100mL dH₂O中加入維生素B₁₂ 50mg；所述的維生素B₇溶液通過如下方法制得：于100mL dH₂O中加入維生素B₇ 50mg；所述維生素B₁溶液通過如下方法制得：于100mL，dH₂O中加入維生素B₁ 0.2g。

3.根據權利要求1所述的一種適合黃群藻生長的DY-IV培養基的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)于滅菌的1L燒杯中加500mL超純水，在磁力攪拌器的緩慢攪拌作用下，按照上述培養基各組分的濃度計算加入量，將除金屬溶液和維生素溶液以外的各無機鹽組分加入上述燒杯中；

2)待所有無機鹽組分加入后，繼續加入超純水至燒杯中液體總體積成為1L，并加速攪拌至無機鹽組分全部溶解；

3)將所配置溶液移至1L錐形瓶中，用封口膜封蓋容器口，置于高溫滅菌鍋中滅菌，滅菌條件設置為120℃，30min；

4)滅菌完成后，冷卻至室溫，在超凈工作臺中加入使用無菌過濾頭過濾后的上述濃度的金屬溶液、維生素B₁₂溶液、維生素B₇溶液和維生素B₁溶液；

5)搖勻后將培養基置于4℃冰箱存儲。

4.一種使用權利要求1所述的一種適合黃群藻生長的DY-IV培養基的培養方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)用孔徑為20μm或25μm的浮游網在野外采集黃群藻，多次重復操作后放入干凈的采集瓶中；

(2)將樣品用膠頭滴管吸取一滴藻液于載玻片上，置于倒置顯微鏡下觀察，用巴德氏毛細管挑取黃群藻，并于ddH₂O中反復純化，最后挑取至裝有上述配置好的液體培養基的二十四孔板中進行培養；

(3)將二十四孔板置于光照恒溫培養箱中培養，設置培養條件為13-15℃，光照強度為1000Lx，光暗周期各為12h；

(4)待藻體發育到對數生長期時出現肉眼可見的金黃色，按照藻液﹕DY-IV培養基的體積比為1﹕5的比例將其轉入裝有DY-IV培養基的錐形瓶中進行后續培養，將培養體系置于光照恒溫培養箱中，設置培養溫度為13-15℃，光照強度為1000Lx，光暗周期各為12h；

(5)待上述錐形瓶中培養的藻體發育至對數生長期時，按照藻液﹕DY-IV培養基的體積比為3﹕200的比例進行擴培。