[發明專利]光電化學生物傳感器及其在甲基轉移酶活性檢測中的應用

有效

• 申請號: 202110582957.1
• 申請日: 2021-05-27
• 公開（公告）號: CN113406160B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發明（設計）人: 張春陽;崔琳;沈靜竺
• 申請（專利權）人: 山東師范大學
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N27/36;G01N27/327
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 王磊

1.一種光電化學生物傳感器，其特征是，包括：

傳感電極，電極表面覆蓋P型共價有機聚合物膜；

金納米顆粒和雙鏈DNA，所述雙鏈DNA內設有識別位點，所述識別位點能夠被甲基轉移酶甲基化，所述雙鏈DNA的一條單鏈DNA設置為用于連接所述P型共價有機聚合物膜，所述雙鏈DNA的另一條單鏈DNA設置為用于連接金納米顆粒；

內切酶，用于將未甲基化的雙鏈DNA解鏈；

染料，所述染料能夠插入至雙鏈DNA的磷酸骨架中。

2.如權利要求1所述的光電化學生物傳感器，其特征是，雙鏈DNA的一條單鏈DNA通過生物素與鏈霉親和素的配合連接P型共價有機聚合物膜；優選地，P型共價有機聚合物膜表面設置鏈霉親和素；

或，雙鏈DNA的另一條單鏈DNA通過金-硫鍵連接金納米顆粒。

3.如權利要求1所述的光電化學生物傳感器，其特征是，P型共價有機聚合物膜和金納米顆粒分別位于雙鏈DNA的兩端。

4.如權利要求1所述的光電化學生物傳感器，其特征是，雙鏈DNA由單鏈DNA1與單鏈DNA2雜交形成；

單鏈DNA1的序列為：CAC CTC CGG ACT G；

單鏈DNA2的序列為：CAG TCC GGA GGT G。

5.如權利要求1所述的光電化學生物傳感器，其特征是，所述P型共價有機聚合物膜由2,6-二羥基萘-1,5-二甲醛和三(4-氨基苯基)胺通過席夫堿反應獲得；

優選地，傳感電極的制備方法為：向電極表面滴加2,6-二羥基萘-1,5-二甲醛溶液和三(4-氨基苯基)胺溶液，進行反應；

優選地，2,6-二羥基萘-1,5-二甲醛溶液和三(4-氨基苯基)胺溶液中均含有均三甲苯、乙醇和醋酸；

優選地，所述電極為導電玻璃。

6.一種權利要求1～5任一所述的光電化學生物傳感器在甲基轉移酶活性檢測中的應用。

7.一種甲基轉移酶活性的檢測方法，其特征是，提供權利要求1～5任一所述的光電化學生物傳感器；

將雙鏈DNA與待測含有甲基轉移酶的溶液混合第一次孵育，再加入內切酶進行第二次孵育，然后加入傳感電極、金納米顆粒和染料進行混合反應，對反應后的傳感電極進行光電化學檢測。

8.如權利要求7所述的甲基轉移酶活性的檢測方法，其特征是，第一次孵育溫度為36.5～37.5℃；優選地，孵育時間為30～150分鐘；

或，第二次孵育溫度為36.5～37.5℃；優選地，孵育時間為30～150分鐘；

或，將第二次反應后的溶液滴加至傳感電極上進行第三次孵育，再滴加金納米顆粒進行第四次孵育，然后添加染料溶液進行第五次孵育。

9.一種權利要求1～5任一所述的光電化學生物傳感器在篩選甲基轉移酶激動劑和/或甲基轉移酶抑制劑的應用。

10.一種甲基轉移酶活性的檢測試劑盒，其特征是，包括權利要求1～5任一所述的光電化學生物傳感器、緩沖溶液。