[發明專利]金黃色葡萄球菌耐藥表型蛋白質指紋圖譜庫的構建方法

在審

• 申請號: 202110579008.8
• 申請日: 2021-05-26
• 公開（公告）號: CN113311168A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 郝瑩瑩;王月玲;宋真
• 申請（專利權）人: 山東第一醫科大學附屬省立醫院（山東省立醫院）
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N27/62
• 代理公司: 北京八月瓜知識產權代理有限公司 11543
• 代理人: 李斌

1.一種金黃色葡萄球菌耐藥表型蛋白質指紋圖譜庫的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)收集金黃色葡萄球菌株，對收集的菌株進行菌種鑒定和藥物敏感性試驗，得到菌株表型結果；

(2)采用分子生物學的方法對所收集的菌株進行分子流行病學調查，得到菌株表型結果；

(3)構建PVL表達載體，對PVL表達出的蛋白質進行質譜檢測，得到蛋白質指紋圖譜，通過對比步驟(1)和步驟(2)得到的菌株表型結果找到PVL特征峰的位置；

(4)對PBP2a進行質譜檢測，得到蛋白質指紋圖譜，通過對比步驟(1)和步驟(2)得到的菌株表型結果找到PBP2a特征峰的位置；

(5)分別建立不同菌株的蛋白質指紋圖譜，分別建立PVL特征峰和PBP2a特征峰的蛋白質指紋圖譜。

2.根據權利要求1所述的金黃色葡萄球菌耐藥表型蛋白質指紋圖譜庫的構建方法，其特征在于，增加步驟(1)的菌株收集數量，重復步驟(1)～(5)，對步驟(5)得到的數據庫的特異性、敏感性進行進一步驗證。

3.根據權利要求1所述的金黃色葡萄球菌耐藥表型蛋白質指紋圖譜庫的構建方法，其特征在于，步驟(1)中的菌株包括CA-MRSA、CA-MSSA、HA-MRSA和HA-MSSA。

4.根據權利要求3所述的金黃色葡萄球菌耐藥表型蛋白質指紋圖譜庫的構建方法，其特征在于，所述步驟(5)中不同菌種包括CA-MRSA、CA-MSSA、HA-MRSA和HA-MSSA。

5.根據權利要求1所述的金黃色葡萄球菌耐藥表型蛋白質指紋圖譜庫的構建方法，其特征在于，所述步驟(1)中對收集的菌株進行菌種鑒定和藥物敏感性試驗采用的是微生物學方法。

6.根據權利要求5所述的金黃色葡萄球菌耐藥表型蛋白質指紋圖譜庫的構建方法，其特征在于，所述步驟(1)中藥物敏感性試驗是對多種抗生素的藥物敏感性試驗。

7.根據權利要求1所述的金黃色葡萄球菌耐藥表型蛋白質指紋圖譜庫的構建方法，其特征在于，所述步驟(2)中的分子流行病學調查包括：MLST分型、SPA分型、SCCmec分型和毒素篩查。

8.根據權利要求7所述的金黃色葡萄球菌耐藥表型蛋白質指紋圖譜庫的構建方法，其特征在于，毒素篩查為：對包括PVL在內的多種腸毒素進行PCR擴增、測序。