[發明專利]一種人呼吸道病毒核酸多重檢測引物、探針及試劑盒

在審

• 申請號: 202110578889.1
• 申請日: 2021-05-26
• 公開（公告）號: CN113278735A
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發明（設計）人: 范欣;王倩玉;于超計;吳文立;魏星
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京朝陽醫院;北京華諾奧美基因生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京紐樂康知識產權代理事務所(普通合伙) 11210
• 代理人: 劉艷艷

本發明公開了一種人呼吸道病毒核酸多重檢測引物、探針及試劑盒，引物及探針包括針對COVID?19 ORF 1ab、COVID?19 N、H1N1、FluA、FluB、RNase P基因的特異性引物及探針；試劑盒包括核酸擴增反應液、One step預混液、陽性對照品、空白對照品，核酸擴增反應液含有針對COVID?19 ORF 1ab、COVID?19 N、H1N1、FluA、FluB和RNase P基因的特異性引物及探針溶液。本發明的人呼吸道病毒核酸多重檢測的引物、探針及試劑盒，可同時快速檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒、甲型H1N1病毒、新型冠狀病毒，操作簡單，重復性好，成本低廉，適于推廣使用。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，具體來說，涉及一種多重實時熒光PCR法檢測人呼吸道病毒的引物、探針及試劑盒。

背景技術

呼吸道病原體感染人鼻腔、咽喉、氣管和支氣管等系統易引起炎癥造成呼吸道感染(respiratory tract infection，RTI)。呼吸道感染可由多種病原體引起，包括病毒、細菌、支原體、衣原體和霉菌等，其中約80％是由病毒感染引起，最常見的包括流感病毒(influenza virus，Flu)、副流感病毒(human parainfluenza Virus，PIV)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)、腺病毒(adenovirus，ADV)等。呼吸道感染是導致全球范圍內所有年齡人群門診就診和住院的主要原因，且是5歲以下兒童死亡的第二大原因。

流感病毒可以分為甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒及丁型流感病毒4類。(1)甲型流感病毒是引起流行性感冒大流行的最主要病原體。甲型流感病毒表面蛋白HA有16個亞型，NA有9個亞型，病毒可根據HA和NA的組合情況進一步分類為若干亞型。由于HA和NA抗原結構能通過基因位點的突變或基因重組使病毒變異，因此甲型流感病毒屬中的禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)能夠突破種屬屏障感染人類，目前能夠感染人類的AIV有：H5N1、H5N6、H6N1、H7N7、H7N9等亞型。AIV曾暴發式大流行，涉及多個國家和地區。(2)乙型流感病毒。該病毒多在小范圍內流行傳播，目前無亞型之分，引起人類感染的主要是乙型Yamagata系或乙型Victoria系。亞太地區的15個國家在每個月的流行性感冒確診病例中，乙型流感病毒的確診率為0～92％，與甲型流感病毒不同，兒童、老年人等特定人群易感乙型流感病毒，并易引發并發癥，對社會造成的負擔甚至超過甲型流感病毒。(3)丙型流感病毒。該病毒檢出率較低，通常導致輕度感染，對公共衛生和健康影響較小。(4)丁型流感病毒。該病毒是最近幾年才被發現的，主要感染牛、羊、豬等。

冠狀病毒于1937年首次從禽類分離，是一種具有包膜的單股正鏈RNA病毒，直徑約80～200nm，包膜上有棘突，是已知最大的RNA病毒。冠狀病毒分為α、β、γ、δ4組，其中β冠狀病毒又分A、B、C、D 4個亞組。目前發現能感染人的冠狀病毒主要為α、β兩大組。

由于不同呼吸道病原體感染導致的臨床表現相似，僅從臨床表現還不足夠區分感染病原體，因此靈敏、快速和準確的檢測呼吸道病原體對其感染的診斷和治療十分重要。多重實時熒光定量PCR(multiplex real time PCR，mRT-qPCR)通過在反應體系加入熒光染料或熒光標記的特異性探針，能夠實現閉管實時反應，避免交叉污染，一個反應體系可同時檢測多個感染病原體，已廣泛應用于呼吸道病原體的檢測。mRT-qPCR因其高特異性、高靈敏性、快速等優點具有很好的臨床診斷應用價值，因此成為疾病預防控制系統和臨床檢驗系統病原檢測的重要手段及標準之一。

發明內容

針對相關技術中的上述技術問題，本發明提出一種人呼吸道病毒核酸多重檢測引物、探針及試劑盒，能夠克服現有技術的上述不足。

為實現上述技術目的，本發明的技術方案是這樣實現的：