[發(fā)明專利]一種堿性蛋白酶法制備鮮牛奶粗蛋白ACEI混合肽的工藝

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• 申請日: 2021-05-26
• 公開（公告）號: CN113502311A
• 公開（公告）日: 2021-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 賈永紅
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江萬里學(xué)院
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/14;C07K1/30
• 代理公司: 寧波甬致專利代理有限公司 33228
• 代理人: 李迎春

1.一種堿性蛋白酶法制備鮮牛奶粗蛋白ACEI混合肽的工藝，其特征在于：包括以下步驟：

S1:以鮮牛奶為原料脫脂制備粗蛋白；

S2：以所述步驟S1制得的粗蛋白與堿性蛋白酶溶液混合進(jìn)行酶解反應(yīng)的單因素實驗和正交實驗，所述單因素實驗和正交實驗的工藝參數(shù)包括溫度、pH值、酶/底物組成比例和水解時間，所述酶解反應(yīng)的單因素實驗和正交實驗得到粗蛋白的酶水解物；

S3:測定所述步驟S2的酶解反應(yīng)的單因素實驗和正交實驗得到粗蛋白的酶水解物的多肽水解度與ACEI活性，根據(jù)多肽水解度與ACEI活性的測定結(jié)構(gòu)篩選出最佳工藝參數(shù)；

S4：以所述步驟S3篩選出的最佳工藝參數(shù)，將粗蛋白與堿性蛋白酶溶液混合進(jìn)行酶解反應(yīng)，制得鮮牛奶粗蛋白ACEI混合肽。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的堿性蛋白酶法制備鮮牛奶粗蛋白ACEI混合肽的工藝，其特征在于：所述步驟S1具體包括：

S11：將鮮牛奶進(jìn)行攪拌加熱后離心將其脫脂，調(diào)節(jié)pH至4.5-5，使蛋白沉淀；

S12：去除上清液，蒸餾水洗滌蛋白沉淀并調(diào)節(jié)pH至中性，離心去除上清液；

S13：提起沉淀并冷凍干燥，得到鮮牛奶粗蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的堿性蛋白酶法制備鮮牛奶粗蛋白ACEI混合肽的工藝，其特征在于：所述步驟S11中加熱溫度為77℃，攪拌時間為30分鐘，離心速度為3800rpm，離心時間為15分鐘。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的堿性蛋白酶法制備鮮牛奶粗蛋白ACEI混合肽的工藝，其特征在于：所述步驟S2中以所述步驟S1制得的粗蛋白與堿性蛋白酶溶液混合進(jìn)行酶解反應(yīng)包括：

將所述步驟S1制得的粗蛋白加入至蒸餾水中充分溶解，按設(shè)定值調(diào)節(jié)溶液pH后，加入設(shè)定量的堿性蛋白酶，在恒溫振蕩器內(nèi)按設(shè)定溫度進(jìn)行水解，達(dá)到設(shè)定的水解時間后進(jìn)行水浴反應(yīng)使酶滅活，冷卻至室溫。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的堿性蛋白酶法制備鮮牛奶粗蛋白ACEI混合肽的工藝，其特征在于：所述步驟S2中，單因素實驗的工藝參數(shù)如下：pH值設(shè)定為8、10、12三個參數(shù)，溫度設(shè)定為20℃、40℃、60℃三個參數(shù)，酶與底物質(zhì)量配比為1:60、1:40、1:20三個參數(shù)，水解的時間為60min、180min、300min三個參數(shù)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種堿性蛋白酶法制備鮮牛奶粗蛋白ACEI混合肽的工藝，其特征在于：所述步驟S2中，正交試驗為L₂₅(5⁴)正交實驗，且L₂₅(5⁴)正交實驗的四因素五水平參數(shù)為：溫度為37℃、38℃、39℃、40℃、41℃，pH值為8、9、10、11、12，酶與底物的質(zhì)量配比為1:60、1:50、1:40、1:30、1:20，水解時間為60min、120min、180min、240min、300min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種堿性蛋白酶法制備鮮牛奶粗蛋白ACEI混合肽的工藝，其特征在于：所述步驟S3中，所述多肽水解度的測定方法為雙縮脲法。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種堿性蛋白酶法制備鮮牛奶粗蛋白ACEI混合肽的工藝，其特征在于：所述步驟S3中，所述多肽水解度測定時標(biāo)準(zhǔn)曲線制定所采用的標(biāo)準(zhǔn)品為Gly-Gly-Tyr-Arg四肽標(biāo)準(zhǔn)品。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種堿性蛋白酶法制備鮮牛奶粗蛋白ACEI混合肽的工藝，其特征在于：所述步驟S4中，所述ACEI的活性測定方法為HHL法。