[發明專利]建立小鼠腹透腹膜損傷模型的方法及BMSCs外泌體的應用

有效

• 申請號: 202110577982.0
• 申請日: 2021-05-26
• 公開（公告）號: CN113303280B
• 公開（公告）日: 2022-11-01
• 發明（設計）人: 何婭妮;喻芳;陳客宏;陳佳
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍陸軍特色醫學中心
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;A61K35/12;A61K35/28;A61P29/00;C12N5/0775
• 代理公司: 重慶鼎慧峰合知識產權代理事務所(普通合伙) 50236
• 代理人: 龔世妍

本發明涉及一種建立小鼠腹透腹膜損傷模型的方法，將腹膜炎患者透析后的腹透流出液注射到小鼠腹腔內。進一步以所建立的小鼠腹透腹膜損傷模型為基礎，不斷研究可治療腹透相關性腹膜損傷的治療方法，最后通過動物實驗明確外泌體修復腹透腹膜損傷的作用、摸索最優治療途徑、時機、劑量、頻次和療程，為應用外泌體防治腹透腹膜纖維化奠定堅實理論基礎，也為未來解決腹透腹膜纖維化導致過早腹膜失功的重要臨床問題提供創新有效安全的方法。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，涉及建立小鼠腹透腹膜損傷模型的方法及BMSCs外泌體的應用。

背景技術

腹膜透析(Peritoneal Dialysis，PD)是目前終末期腎病患者廣泛采用的重要腎臟替代治療方式之一，是利用腹膜半透膜生物學特性進行溶質、毒素和水分清除的治療模式。腹膜透析具有對血流動力學影響小、保護殘余腎功能、操作簡單、價格相對低廉、保持更好的生活質量等獨特優勢。隨著腹膜透析技術的推廣，我國腹膜透析人數和規模呈不斷上升的趨勢。然而，多數腹透患者往往由于腹透相關性腹膜炎、長期腹透流出液高糖暴露等原因而發生腹膜結構和功能損傷，最終導致腹膜纖維化、超濾衰竭而不得不提前終止腹透治療。腹膜纖維化發展的主要危險因素是腹膜反復暴露于生物不相容性的腹膜透析液(葡萄糖、葡萄糖降解產物(乙二醛、甲醛、3-脫氧葡糖酮、甲基乙二醛))引起的腹膜間皮細胞功能改變及增殖，以及感染或腹透流出液長期刺激下導致的以免疫細胞浸潤為特征的急慢性炎癥，二者往往相互促進導致腹膜結構功能進一步損傷。目前，預防或延緩腹透相關性腹膜纖維化尚無有效方法。因此，研發腹透相關性腹膜損傷修復方法和治療藥物顯得至關重要。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種建立小鼠腹透腹膜損傷模型的方法，還提供一種BMSCs外泌體在制備腹透腹膜損傷疾病的藥物中的新應用。

為達到上述目的，本發明提供如下技術方案：

1.一種建立小鼠腹透腹膜損傷模型的方法，所述方法的具體步驟為：將人腹膜炎腹透流出液注射到小鼠腹腔內。

進一步，所述腹透流出液為腹膜炎患者透析后的液體經離心、細菌過濾得到的。

進一步，腹膜炎患者腹透流出液的納入標準為：

a.首次入院夜間留腹；b.未使用抗生素；c.腹水培養革蘭氏陰性桿菌；d.腹水檢測白介素-65000pg/ml，降鈣素原0.3ng/ml、內毒素0.1EU/mL。

進一步，腹腔注射人腹膜炎腹透流出液0.1mL/g，每日1次，持續4-6周。

2.BMSCs外泌體在制備腹透腹膜損傷疾病的藥物中的應用。

進一步，所述BMSCs外泌體來源于BMSCs細胞培養上清液。

進一步，所述BMSCs外泌體的制備方法為：取BMSCs細胞培養上清液，2000-3000g 4℃離心30min，取上清；上清經0.22μm濾膜過濾，濾液經100,000-120,000g 4℃超速離心1.5-2h；用相同體積的預冷PBS重懸沉淀，懸液經4℃100,000-120,000g離心1.5-2h；沉淀再用預冷PBS重懸即可。

進一步，所述BMSCs外泌體的制備方法為：取BMSCs細胞培養上清液，2000g 4℃離心30min，取上清；上清經0.22μm濾膜過濾，濾液經120,000g 4℃超速離心2h；用相同體積的預冷PBS重懸沉淀，懸液經4℃120,000g離心2h；沉淀再用預冷PBS重懸即可。

進一步，所述BMSCs外泌體的應用方法為腹腔注射。

進一步，BMSCs外泌體腹腔注射量為按體重計100μg/kg/次。