[發(fā)明專利]抗新型冠狀病毒疫苗及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110576082.4
• 申請日: 2021-05-26
• 公開（公告）號: CN113117069B
• 公開（公告）日: 2022-09-30
• 發(fā)明（設計）人: 蔣俊;林耀新;楊超;王茜婷;林鑫;文高柳;栗世鈾;王浩
• 申請（專利權(quán)）人: 北京啟辰生生物科技有限公司;啟辰生生物科技（珠海）有限公司
• 主分類號: A61K39/215
• 分類號: A61K39/215;A61P31/14;C07K19/00;A61K9/127;A61K9/51;A61K47/24
• 代理公司: 北京北匯律師事務所 11711
• 代理人: 高元吉

本發(fā)明公開抗新型冠狀病毒疫苗及其制備方法。本發(fā)明的抗新型冠狀病毒疫苗為由脂質(zhì)外層和核糖核酸分子內(nèi)核構(gòu)成的納米顆粒結(jié)構(gòu)，脂質(zhì)外層由脂質(zhì)體構(gòu)成，核糖核酸分子包括用于編碼產(chǎn)生靶向溶酶體的第一抗原的mRNA和/或用于編碼產(chǎn)生靶向胞質(zhì)的第二抗原的mRNA，和用于編碼產(chǎn)生外分泌的靶向B細胞的第三抗原的mRNA。本發(fā)明的疫苗能產(chǎn)生多樣性的免疫反應。

技術領域

本發(fā)明涉及納米疫苗，具體地涉及抗新型冠狀病毒的納米顆粒疫苗及其制備方法。

背景技術

COVID-19急性呼吸疾病(2019Novel Coronavirus Acute Respiratory Disease)是當前嚴重威脅公共衛(wèi)生安全的傳染病。自第一例患者確診以來，并在世界范圍擴散。已被WHO宣布為全球突發(fā)公共衛(wèi)生事件(PHEIC)，這也是WHO傳染病應急機制中的最高等級。

現(xiàn)已確認引發(fā)COVID-19的病毒為一種新型冠狀病毒SARS-CoV-2，這種病毒歸屬于Sarbe病毒亞屬，正冠狀病毒亞科，但形成了另外一簇的進化分枝。SARS-CoV-2與MERS-CoV和SARS-CoV都不同，它成為可以感染人類的冠狀病毒科中的第七個成員。與SARS-CoV比，SARS-CoV-2傳播力更強；潛伏期更長,可在潛伏期傳播；傳染源更難切斷。

人類已有超過30種疾病可以通過疫苗有效預防。但針對冠狀病毒家族疫苗，研發(fā)依然面臨巨大挑戰(zhàn)。SARS-CoV-2為β冠狀病毒，與SARS病毒基因組相似性為～80％。SARS-CoV-2病毒免疫原性可參考冠狀病毒家族中SARS-CoV和MERS-CoV的抗原表位研究。報道的SARS和MERS疫苗主要選擇全長或者部分S蛋白作為免疫原。表達SARS和MERS病毒S蛋白的DNA疫苗，在多個動物模型中均能誘導出強烈的免疫應答，抵抗病毒感染。多個正在進行的MERS疫苗正在進行臨床研究。

S蛋白為SARS-CoV-2的主要抗原表位區(qū)。上海巴斯德研究所及石正麗團隊發(fā)現(xiàn)SARS-CoV-2病毒進入人體細胞的受體與SARS-CoV相同，為ACE2(血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2)。2020年2月20日，《科學》雜志在線發(fā)表UT Austin大學冷凍電鏡分析Spike蛋白三聚體高清結(jié)構(gòu)(Jason McLellan)，再度確認SARS-CoV-2的S蛋白結(jié)構(gòu)是疫苗應對的關鍵區(qū)域。該結(jié)果為S蛋白作為疫苗研發(fā)靶抗原提供重要依據(jù)。

國內(nèi)外數(shù)十家機構(gòu)20多個疫苗項目正在研發(fā)，包括減毒/滅活疫苗、重組蛋白亞單位疫苗、DNA疫苗、腺相關病毒疫苗、RNA疫苗。

雖然滅活疫苗有成功的開發(fā)歷史，但部分RNA病毒疫苗產(chǎn)品雖可誘導出中和抗體，但免疫后的人群仍會被病毒感染。DNA疫苗和蛋白亞單位疫苗，對冠狀病毒家族目前尚無成功研發(fā)案例。DNA疫苗必須進入細胞核內(nèi)發(fā)揮作用，對基因組的安全性產(chǎn)生影響。mRNA疫苗可以克服DNA疫苗的缺點。但是目前核酸疫苗采用的是spike全長或者部分序列，即使誘導出中和抗體阻斷病毒進入細胞，也不具備誘導CD8+T細胞反應特異清除病毒感染細胞。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術中的至少部分技術問題，本發(fā)明提供能夠產(chǎn)生多樣性免疫反應的抗新型冠狀病毒納米顆粒疫苗。具體地，本發(fā)明包括以下內(nèi)容。

本發(fā)明的第一方面，提供一種抗新型冠狀病毒疫苗，其為由脂質(zhì)外層和核糖核酸分子內(nèi)核構(gòu)成的納米顆粒結(jié)構(gòu)，所述脂質(zhì)外層由脂質(zhì)體構(gòu)成，所述核糖核酸分子包括用于編碼產(chǎn)生靶向溶酶體的第一抗原的mRNA和/或用于編碼產(chǎn)生靶向胞質(zhì)的第二抗原的mRNA，和用于編碼產(chǎn)生外分泌的靶向B細胞的第三抗原的mRNA。

在某些實施方案中，抗新型冠狀病毒疫苗的第一抗原為融合蛋白，其包含溶酶體信號肽和源自SARS-Cov-2 S蛋白的第一片段，可選地，進一步包含與溶酶體信號肽連接的腔內(nèi)區(qū)。

在某些實施方案中，第一抗原進一步包含跨越溶酶體膜的跨膜區(qū)，且所述第一片段位于溶酶體信號肽或腔內(nèi)區(qū)與跨膜區(qū)之間。更優(yōu)選地，第一抗原進一步包括與跨膜區(qū)連接胞質(zhì)區(qū)。