[發(fā)明專利]一種液晶型適配體生物傳感器及其制備方法和在檢測前列腺特異性抗原中的應(yīng)用

在審

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• 申請日: 2021-05-25
• 公開（公告）號: CN113406011A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 金麗虹;潘興隆;呂九宮;牟曉雨;張翔宇;李晶怡;申炳俊;夏冰;高妍
• 申請（專利權(quán)）人: 長春理工大學(xué)
• 主分類號: G01N21/21
• 分類號: G01N21/21;G01N21/17;G01N33/573
• 代理公司: 上海大邦律師事務(wù)所 31252
• 代理人: 胡紅芳

1.一種液晶型適配體生物傳感器，其特征在于，所述生物傳感器包括依次排列的上玻片、銅載網(wǎng)和下玻片；所述上玻片和下玻片部分或全部重合，且所述銅載網(wǎng)置于所述上玻片和下玻片之間；其中：

所述下玻片的組裝膜基底經(jīng)DMOAP和APTES混合液處理，再用二醛化合物的一個醛基對APTES膜氨基進(jìn)行醛基化修飾、另一醛基固定5′端修飾氨基PSA適配體；

所述銅載網(wǎng)置于所述下玻片固載所述氨基PSA適配體的檢測物面中心，并且所述銅載網(wǎng)上布滿5CB液晶分子；

所述上玻片經(jīng)DMOAP處理以誘導(dǎo)所述5CB液晶分子的垂直取向。

2.權(quán)利要求1所述液晶型適配體生物傳感器的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)上玻片預(yù)處理：用DMOAP修飾經(jīng)表面潔凈化處理的上玻片，將修飾后的上玻片洗凈于室溫下浸泡在體積百分比為0.35％的DMOAP水溶液中，時間為30min；然后，用超純水沖洗、N₂吹干，110℃恒溫干燥1h，得到固定DMOAP膜的上玻片備用；

(2)下玻片預(yù)處理：用DMOAP和APTES混合液修飾經(jīng)表面潔凈化處理的下玻片，得到下玻片自組裝DMOAP和APTES混合膜，清洗后置于體積百分比為0.3％DMOAP和0.3％APTES的無水乙醇混合液中，80℃浸泡2h，然后用無水乙醇、超純水依次沖洗，N₂吹干，110℃恒溫干燥1h；再用二醛化合物的一個醛基對APTES膜氨基進(jìn)行醛基化修飾、另一醛基固定5′端修飾氨基PSA適配體；

(3)銅載網(wǎng)預(yù)處理：銅載網(wǎng)置于步驟(2)得到的下玻片固載所述PSA適配體的檢測物面中心，將5CB液晶分子轉(zhuǎn)移并布滿整個所述銅載網(wǎng)；

(4)將步驟(1)和步驟(2)中預(yù)處理得到的上玻片和下玻片疊合在一起，且將步驟(3)中預(yù)處理得到銅載網(wǎng)置于它們之間，獲得包括預(yù)處理后的上玻片、銅載網(wǎng)和下玻片依次排列組成的所述生物傳感器。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述表面潔凈化處理為：將上玻片或下玻片用新配置的Piranha溶液于80℃浸泡2h，洗凈后在無水乙醇中超聲30min，去除所述上玻片和下玻片表面的有機(jī)物并使玻片表面羥基化，然后用大量超純水沖洗，去除殘留酸液，N₂吹干，110℃恒溫干燥3～5h后，取出防塵備用。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述下玻片預(yù)處理過程為：

用APTES-GA/DMOAP修飾下玻片，得到DMOAP和APTES復(fù)合膜基底的下玻片，然后置于體積百分比為0.1％的GA水溶液中，室溫下浸泡45min，使下玻片表面APTES醛基化，取出后用超純水沖洗，N₂吹干，得到修飾了APTES-GA/DMOAP基底的下玻片備用。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述下玻片預(yù)處理過程為：

用APTES-GA-Apt/DMOAP修飾下玻片，將200μL濃度為100pmol/L適配體Apt的Tris-HCl溶液滴加到所述修飾了APTES-GA/DMOAP的下玻片膜基底表面，37℃下孵育12h，用體積比為0.005％、pH值為7.0的十二烷基硫酸鈉清洗液和超純水沖洗，去除下玻片上未固定的多余適配體，小流量N₂吹干備用。

6.根據(jù)權(quán)利要求2至6任一所述的制備方法，其特征在于，還包括所述下玻片上未反應(yīng)的醛基活性位點封閉：在室溫下用80mmol/L甘氨酸溶液浸泡所述預(yù)處理的下玻片1h，用超純水沖洗，N₂吹干，去除非特異性吸附物質(zhì)的干擾。

7.根據(jù)權(quán)利要求2至6任一所述的制備方法，其特征在于，所述氨基PSA適配體的堿基序列為：5′-5AmMC6-AATTAAAGCTCGCCATCAAATAGC-3′；其中，5AmMC6是指在適配體5′端修飾氨基。