[發明專利]一種人體血漿中頭孢拉定濃度測定方法

在審

• 申請號: 202110566269.6
• 申請日: 2021-05-24
• 公開（公告）號: CN113376295A
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發明（設計）人: 王小董;許楊;孫珍珍;曾虹
• 申請（專利權）人: 安徽萬邦醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 合肥律眾知識產權代理有限公司 34147
• 代理人: 趙娟

本發明公開了一種人體血漿中頭孢拉定濃度測定方法，先預處理血漿樣品，再將取適量預處理后的血漿樣品，注入液相色譜串聯質譜儀中進行檢測，計算頭孢拉定峰面積As和內標頭孢拉定?d5峰面積Ai的比值Y＝As/Ai，將比值Y帶入標準曲線方程，以峰面積比值Y對血藥濃度作回歸計算，得到待測血漿樣品中的頭孢拉定濃度；標準曲線方程由不同濃度的血漿標樣，注入液相色譜串聯質譜儀中，經檢測、計算得出。本發明快速、準確、線性范圍寬、操作簡便；具有較高的特異性，靈敏度高，血漿最低定量限為20ng/mL，能準確測定血漿中頭孢拉定的濃度。

技術領域

本發明涉及人體血漿檢測技術領域，尤其是一種人體血漿中頭孢拉定濃度測定方法。

背景技術

頭孢拉定(英文名稱cefadine，以下簡稱CFD)是第1代半合成頭孢菌素，是唯一可供口服、肌內及靜脈注射用的頭孢菌素，具有廣譜抗菌作用。口服吸收完全，血漿中頭孢拉定質量濃度(以下簡稱濃度)高，已建立的血漿中頭孢拉定濃度測定方法主要有微生物法和HPLC-UV法。現有測定方法的流動相較為復雜，樣本處理方法較為繁瑣。

發明內容

針對現有人體血漿中頭孢拉定濃度測定方法存在的不足之處，本發明提供一種便捷、快速、高效的液相質譜聯用測定人體血漿中頭孢拉定濃度的方法。

一種人體血漿中頭孢拉定濃度測定方法，先預處理血漿樣品，再將取適量預處理后的血漿樣品，注入液相色譜串聯質譜儀中進行檢測，計算頭孢拉定峰面積As和內標頭孢拉定-d5峰面積Ai的比值Y＝As/Ai，將比值Y帶入標準曲線方程，以峰面積比值Y對血藥濃度作回歸計算，得到待測血漿樣品中的頭孢拉定濃度；標準曲線方程由不同濃度的血漿標樣，注入液相色譜串聯質譜儀中，經檢測、計算得出。

優選的，注入液相色譜串聯質譜儀中進行檢測，

其色譜條件：色譜柱Welch Ultimate XB-C18，柱規格為4.6*50mm，5μm；色譜柱溫40℃；流動相A為水、甲酸，體積百分比100：0.1；流動相B為甲醇、甲酸，體積百分比100：0.1；柱塞洗液為水、甲醇，體積百分比90：10；自動進樣器溫度4℃；梯度洗脫，流速0.8mL/min，進樣量5μL，分析時間4.0min；

其質譜條件：離子源為電噴霧離子源，噴霧電壓為5500V，氣簾氣20psi，霧化溫度550℃，霧化氣40psi，輔助氣45psi，碰撞氣為8psi；頭孢拉定和頭孢拉定-d5的去簇電壓均為60V；正離子方式檢測，掃描方式為多重反應監測，用于定量分析的離子反應分別為頭孢拉定：m/z350.3→176.3，頭孢拉定-d5：m/z 355.3→181.2。

優選的，梯度洗脫程序為：0-1.2min，80％A→70％A，20％B→30％B；1.2-3min，70％A→70％A，30％B→30％B；3-3.01min，70％A→80％A，30％B→20％B；3.01-4min，80％A，20％B→Pump_Pressure.Acqoff。

優選的，建立標準曲線方程包括以下步驟：

步驟1，取190μL空白血漿8份置于聚丙烯管中，分別精密加入10μL濃度為0.4μg/mL、0.8μg/mL、4μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、80μg/mL、320μg/mL、400μg/mL的頭孢拉定溶液并混勻，配制成血漿標樣1-8；

步驟2，對血漿標樣1-8進行預處理；

步驟3，分別取5μL標樣注入高效液相色譜串聯質譜儀中，檢測標樣中頭孢拉定和內標頭孢拉定-d5的色譜峰，根據色譜峰得到標準曲線方程。