[發明專利]一種沙棘蛋白多肽的制備方法

在審

• 申請號: 202110562191.0
• 申請日: 2021-05-24
• 公開（公告）號: CN113481269A
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: 孫允武;馬正創;解芳;麻淑珍;張靖鵬;李林
• 申請（專利權）人: 青海康普生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/14;C07K1/30
• 代理公司: 青海省專利服務中心 63100
• 代理人: 周同永

1.一種沙棘蛋白多肽的制備方法，其特征在于，具體步驟包括如下：

步驟1，酶解：稱取沙棘蛋白，用純水混合按照一定料液比與沙棘蛋白溶液，加入蛋白酶，進行酶解；

步驟2，滅酶：酶解至預定時間后，調節pH至沙棘籽蛋白的等電點，而后將酶解體系移至預先升溫至90℃的恒溫震蕩水浴鍋內，保持15min使酶的活性喪失；

步驟3，離心：將滅酶后的沙棘蛋白酶解體系冷卻，離心取上清液，即為沙棘多肽提取物；

步驟4，濃縮：用旋轉蒸發器濃縮離心后的沙棘多肽提取物，濃縮溶液至濃度為45～50％；

步驟5，真空冷凍干燥：將濃縮后的沙棘多肽提取物在5℃條件下預冷，然后將其在-80℃下冷凍，用真空冷凍干燥機在-90℃下真空冷凍干燥36h，即得到沙棘蛋白肽粉末。

2.根據權利要求1所述的一種沙棘蛋白多肽的制備方法，其特征在于，所述的蛋白酶為酸性蛋白酶，酶解條件為溫度為40～50℃、pH值為2～3、加酶量3000～5000u/g、料液比1:15～25。

3.根據權利要求2所述的一種沙棘蛋白多肽的制備方法，其特征在于，所述的蛋白酶為酸性蛋白酶，酶解條件為溫度為50℃、pH值為3、加酶量4000u/g、料液比1:20。

4.根據權利要求1所述的一種沙棘蛋白多肽的制備方法，其特征在于，所述的沙棘蛋白為以沙棘籽粕為原料，利用醇提+堿提酸沉+酶解的提取方法制備，具體步驟為：

步驟1，原料預處理：將沙棘籽粕烘干粉碎后，過40～120目篩，優化的80目，備用；

步驟2，酶解：在步驟1得到的沙棘籽粕中，加120～360u/g纖維素酶去纖維素，優化為加240u/g纖維素酶去纖維素，使與纖維素結合的蛋白分離出來；

步驟3，醇提：將75％乙醇加入提取罐內，開啟攪拌，緩慢加入沙棘籽粕粉，嚴禁把沙棘籽粕一并倒入提取罐，開啟蒸汽加熱，加熱到45℃攪拌90min后離心，留沙棘籽粕沉淀；其中，所加沙棘籽粕與乙醇的料液比為1:6～14，優化為沙棘籽粕與乙醇的料液比為1:12；

步驟4，減解：

S1，第一次減提：將步驟1預處理過的沙棘籽粕與水按1：8～16的料液比加入另一提取罐內，開啟攪拌，緩慢加入醇提離心后的沙棘籽粕沉淀，攪拌均勻；開啟蒸汽加熱，加熱到30～70℃時緩慢加入20％NaOH水溶液，調pH至8～12攪拌，在反應過程中，及時監控pH的變化情況，及時加堿調pH至8～12，離心留上清液，沙棘籽粕沉淀用于第二次堿提，其中減提時間為20～60min；

S2，第二次減提：依照步驟S1的方法對沙棘籽粕沉淀進行第二次堿提，離心后將兩次上清液混合在一起；

其中，上述減提步驟中，沙棘籽粕原料與水的料液比為1:10～14；蒸汽加熱的加熱溫度為40～50℃；pH為10～11；減解時間為40～50min；

步驟5，酸沉：將步驟4堿提離心后的上清液加入新的提取罐中，在攪拌條件下緩慢加入乳酸，調pH至4.5；pH穩定后停止攪拌，靜置6～8h，備用；

步驟6，離心：將酸沉靜置后的溶液離心，取出離心后的沉淀；

步驟7，干燥、粉碎：溫度在45℃以下將沙棘籽蛋白提取物烘干，粉碎烘干后的蛋白粉并且過80目篩網。