[發明專利]抗非洲豬瘟P72蛋白單域抗體及應用

有效

• 申請號: 202110561435.3
• 申請日: 2021-05-22
• 公開（公告）號: CN113087790B
• 公開（公告）日: 2023-01-17
• 發明（設計）人: 劉志杰;楊吉飛;牛慶麗;敬夢瑤;趙亞茹;關貴全;殷宏
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C12N15/13;A61K39/42;A61K47/68;A61P31/20;G01N33/569
• 代理公司: 北京力量專利代理事務所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 毛婷

本發明屬于生物醫學或生物制藥技術領域，具體涉及一種抗非洲豬瘟P72蛋白單域抗體及應用。首先，本發明提供了一種抗非洲豬瘟P72蛋白單域抗體，所述單域抗體能夠與天然抗原很好的反應，且能夠顯著抑制非洲豬瘟病毒P72蛋白的表達，進而實現對非洲豬瘟病毒的復制的抑制，具有顯著的抗非洲豬瘟病毒的功效；其次，本發明提供了一種表達所述抗非洲豬瘟P72蛋白單域抗體的重組載體，所述重組載體經誘導純化后能夠獲得抗非洲豬瘟P72蛋白單域抗體。

技術領域

本發明屬于生物醫學或生物制藥技術領域，具體涉及一種抗非洲豬瘟P72蛋白單域抗體及應用。

背景技術

非洲豬瘟(African Swine Fever，ASF)是由非洲豬瘟病毒(ASFV)感染引起的一種以豬發熱和豬全身臟器出血為特征的急性烈性傳染病，對于家豬的病死率高達100％。該病首先于1921在肯尼亞爆發，隨后在整個非洲的家豬和野豬中廣泛流行。當前沒有商品化的有效疫苗，非洲豬瘟疫情一旦發生，只能通過撲殺手段進行控制，但是這種方式不僅導致經濟損失，無法滿足我國規模化養豬的需要。因此，疫苗作為預防和控制病毒傳染病最有效、最經濟的手段，對于我國規模養豬模式下的非洲豬瘟的防治至關重要。但非洲豬瘟病毒(ASFV)結構復雜、基因組龐大，大部分功能未知，感染與致病機制不清，疫苗創制的理論認知有限，其流行已逾百年，但仍未有商品化的疫苗問世。

抗體是機體免疫系統中重要的免疫分子，抗體的研發對非洲豬瘟的治療起著至關重要的推動作用。但ASFV的基因組復雜，目前我們對其各功能蛋白的作用機制知之甚少，故傳統抗體的研發也顯得尤為困難。其中，中國專利(公布號CN110078819A)一種抗非洲豬瘟的抗體及其制備方法，通過用非洲豬瘟病毒免疫健康雌性禽類動物，當被免疫的所述禽類動物卵黃內非洲豬瘟抗體含量超過40ng/mL時收集卵黃，提取所述卵黃中的水溶性組分，純化后得到。所述的抗體為禽源非洲豬瘟抗體，存在異源性反應，且沒有克服常規抗體分子量較大的問題。

其中，單域抗體(single domain antibody，sdAb)僅有一個重鏈可變區結構域(VHH)，該結構域最初發現于駱駝科動物和鯊魚的血清中分離出的一種抗體HCAb，通過基因手段，擴增出其中的VHH片段。單獨克隆并表達出來的VHH區和完整的抗體一樣，具有與原重鏈抗體相當的結構穩定性以及同等的抗原結合活性。但是與完整抗體相比，單域抗體具有以下優點：①單域抗體的分子質量更低，這使其更容易滲透到組織中；②由于單域抗體更容易通過腎臟清除，因此其藥代動力學半衰期也更短；③由于單域抗體沒有可結晶區，因此無法通過補體系統引發細胞毒性；④單域抗體在極端溫度和pH環境中具有良好的穩定性，其水溶性和構象穩定性是常規抗體無法比擬的，且這種單體結構域能高特異性、高親和力地與抗原結合，從而中和或封閉相對隱蔽的抗原表位。綜上，單域抗體是目前可以得到的具有完整功能、穩定、可結合抗原的最小單元，由于相對分子質量小、穩定性強、可溶性好、抗原結合性能好、易于表達及免疫原性低等特點，其具有廣闊的應用前景，尤其在疾病的治療和診斷中具有很大的價值。

p72蛋白是ASFV中的關鍵結構蛋白，是一種衣殼蛋白，能保護病毒核酸免受環境中核酸酶或其他理化因素破壞，同時參與病毒的感染過程且具有良好的免疫原性，該蛋白產生于病毒感染晚期，p72作為ASFV的重要抗原蛋白，是病毒二十面體的主要成分，對于病毒衣殼的形成至關重要，參與病毒結合細胞。因此，開發一種新型抗非洲豬瘟P72蛋白單域抗體，使其具有較好的特異性、阻斷活性，更佳的臨床藥效，并且生產簡便，能夠降低生產成本，減輕患者用藥負擔，已經成為亟待解決的問題。

發明內容

針對上述問題，本發明提供了一種新型抗非洲豬瘟P72蛋白單域抗體及其應用。具體地，本發明的目的在于提供一種對非洲豬瘟具有抑制效果的抗非洲豬瘟P72蛋白單域抗體。具體方案包括以下內容：

第一方面，本發明提供了一種抗非洲豬瘟P72蛋白單域抗體，所述抗非洲豬瘟P72蛋白單域抗體的氨基酸序列如SEQ ID NO.1-7任一所示。

優選地，所述抗非洲豬瘟P72蛋白單域抗體的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。