[發(fā)明專利]一種激光直寫石墨烯/貴金屬納米顆粒復合電極的制備及免疫傳感應用

在審

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• 申請日: 2021-05-21
• 公開（公告）號: CN113295748A
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發(fā)明（設計）人: 李艷霞;汪廣源;龍彩霞;陳毅挺;黃露
• 申請（專利權）人: 閩江學院
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/48;G01N33/543;G01N33/574;B23K26/00;B82Y15/00
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種激光直寫石墨烯/貴金屬納米顆粒復合電極的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

設計三電極系統微電極圖案，采用激光器，在高絕緣PI膜上打印出石墨烯微電極；

于工作電極區(qū)域部分滴加貴金屬前驅體試劑，激光錨定工作區(qū)域，通過激光誘導納米貴金屬顆粒生成，并直接沉積石墨烯表面；

Ag/AgCl漿涂在參比電極上，導電銀漿作為信號輸出接頭，聚二甲基硅氧烷固定工作區(qū)域面積，從而形成激光直寫石墨烯/貴金屬納米顆粒復合電極。

2.根據權利要求1所述的一種激光直寫石墨烯/貴金屬納米顆粒復合電極的制備方法，其特征在于：所述步驟1）、步驟2）中激光打印或激光誘導的條件為：激光器波長450 nm, 電源電壓12 V，激光強度50～100，打印深度5～30，電極工作區(qū)域直徑4 mm。

3.根據權利要求1所述的一種激光直寫石墨烯/貴金屬納米顆粒復合電極的制備方法，其特征在于：所述步驟1）、步驟2）激光打印或激光誘導的條件為：激光器波長450 nm, 電源電壓12 V，激光強度90，打印深度15。

4.根據權利要求1所述的一種激光直寫石墨烯/貴金屬納米顆粒復合電極的制備方法，其特征在于：所述步驟2）中貴金屬前驅體試劑為氯金酸、氯鉑酸、硝酸銀水溶液中的一種，質量濃度為1～10%，體積1～10 μL，自然晾干。

5.一種無標記電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）抗體的組裝：巰基十一酸溶液滴加到權利要求1所制備的激光直寫石墨烯/貴金屬納米顆粒復合電極的工作界面，孵化一段時間，水洗，晾干；接著于工作電極表面滴加1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亞胺鹽酸鹽/ N-羥基琥珀酰亞胺混合液，室溫靜置1小時；電極水洗晾干；工作電極表面滴加抗體溶液，孵化，水洗晾干；接著滴加5 μL 1wt％牛血清白蛋白溶液封閉, 室溫靜置1h，水洗晾干，冷藏，獲得組裝抗體的復合電極；

2）將樣品溶液滴加到步驟1）所制備組裝抗體的復合電極的工作區(qū)域，吸附一段時間，取出電極，水洗晾干；

3）滴加鐵氰化鉀溶液，進行循環(huán)伏安掃描，監(jiān)測峰電流的變化，從而構建無標記電化學免疫傳感器。

6.根據權利要求5所述的一種無標記電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于：所述步驟1）中巰基十一酸水溶液，濃度1～20 mmol/L，體積1～10 μL，孵化時間為5～60 min；1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺摩爾比為1:1，濃度0. 1～10 mmol/L，體積5 μL，分3次滴加，每次間隔20 min，共計孵化時間60 min；所用抗體與目標抗原匹配，濃度為0.1～1mg/mL。

7.根據權利要求5所述的一種無標記電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于：步驟2）中所述樣品為腫瘤標志物中前列腺特異性抗原、糖鏈抗原15-3 、甲胎蛋白、癌胚抗原的一種，濃度0.01～100 ng/mL，體積5～10 μL，孵化時間為5～60 min。

8.根據權利要求5所述的一種無標記電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于：步驟3）中峰電流采用循環(huán)伏安法檢測，電介質溶液為20 μL 5 mmol/L鐵氰化鉀含1.0 mol/L氯化鉀混合溶液, 掃描范圍-0.4～0.4 V，掃速0.1 V/s。

9.一種權利要求5所述方法制備所得的無標記電化學免疫傳感器。

10.如權利要求9所述的無標記電化學免疫傳感器在檢測腫瘤標志物中的應用。