[發明專利]一種測定動物源性飼料原料及飼料中生物胺的檢測方法

有效

• 申請號: 202110554684.X
• 申請日: 2021-05-21
• 公開（公告）號: CN113281435B
• 公開（公告）日: 2023-08-22
• 發明（設計）人: 喬煦瑋;李欣欣;梁玉樹;何開蓉;周桂蓮;李勇;楊青;劉尚群;杜倩男
• 申請（專利權）人: 新希望六和股份有限公司;四川新希望六和科技創新有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/96;G01N30/34;G01N30/24;G01N30/74;G01N30/86;G01N30/88
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本發明提供了一種測定動物源性飼料原料及飼料中生物胺的檢測方法，包括以下步驟：（1）制備混合標準工作溶液；（2）根據標準制備試樣；（3）稱取樣品置于100mL具塞三角瓶中，并加入1%磺基水楊酸溶液，進行提取；（4）移取上清液至離心管中，加入6%磺基水楊酸溶液；（5）加入脫脂劑二氯甲烷，將離心管震蕩；（6）將離心管離心；（7）將樣品稀釋至濃度為6mg/kg?30mg/kg，采用2?mol/L或4mol/L氫氧化鉀溶液調節pH為2.5~5.5混勻；（8）將混勻的液體經過水相濾膜，過濾至樣品瓶中；（9）使用氨基酸分析儀對樣品進行生物胺含量檢測：生物胺含量由其目標分析物峰面積和標準品峰面積之比采用外標法進行定量。本發明操作較為簡單、衍生效果好、結果穩定。

技術領域

本發明涉及生物胺檢測領域，尤其涉及一種測定動物源性飼料原料及飼料中生物胺的檢測方法。

背景技術

生物胺是一類具有生物活性的含氮低分子有機化合物，也是一種堿性化合物。其主要是由相應的氨基酸通過微生物的脫羧作用形成，或者是由醛酮類物質在相關酶的作用下產生。常見的生物胺包括組胺、腐胺、尸胺、精胺、亞精胺、酪胺等。高濃度的生物胺具有一定的毒害作用，組胺是生物胺中毒性最大的，酪胺的毒性次之，但其他生物胺的存在會增強組胺和酪胺的不良作用。研究表明，動物體內殘留的數量與攝入的動物源性飼料原料相關，如魚粉、肉骨粉等。

目前，生物胺的測定方法包括：間接檢測技術（微生物學法、分子生物學法）和直接檢測技術（色譜法、免疫識別法、酶促反應法、酸堿度變化法）。其中，在飼料行業采用較多的是《GB/T?23884-2009?動物源性飼料中生物胺的測定?高效液相色譜法》，是動物源性飼料中生物胺測定采用較多的一種方法。而且，根據文獻調查，國內外最常采用的飼料中生物胺檢測方法也是柱前衍生-高效液相色譜檢測的方法。此外，根據最新2020年發布的《〈動物源性飼料中生物胺的測定?高效液相色譜法〉國家標準修訂編制說明（征求意見稿）》中發現，其生物胺檢測方法依然采用的是柱前衍生-高效液相色譜法。

柱前衍生-高效液相色譜法主要是利用某一種提取液從樣品中提取出生物胺，再加入衍生試劑水浴加熱進行衍生，并在衍生的過程中定期震蕩，衍生完畢后，然后將試樣從水樣轉移至有機相，最后過濾并采用高效液相色譜進行定性定量分析。柱前衍生-高效液相色譜法在使用過程中，柱前衍生由于受溫度、衍生時定期震蕩以及試樣從水相向有機相的轉移等操作影響，往往會使得生物胺檢測值偏低等。而且，高效液相色譜檢測時尸胺和組胺不能夠完全分離，色譜圖周圍雜質峰較多，干預測定結果。因此，柱前衍生-高效液相色譜法具有操作復雜、衍生過程不好控制、色譜檢測干擾大、結果偏低等缺點。

如何解決上述技術問題為本發明面臨的課題。

發明內容

為了解決現有技術的不足，本發明提供了一種操作較為簡單、衍生效果好、結果穩定的離子色譜-柱后衍生測定動物源性飼料原料及飼料生物胺的定性定量方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：本發明提供了一種測定動物源性飼料原料及飼料中生物胺的檢測方法，包括以下步驟：

（1）制備混合標準工作溶液：將1.0?μmol/mL組胺、腐胺、尸胺、精胺、亞精胺與酪胺混合標準溶液作為標準儲備液，于4℃保存，移取1.0mL混合生物胺標準儲備液至10mL棕色容量瓶中，用超純水定容至刻度，配置成濃度為100nmol/mL的混合生物胺標準工作液，通過氨基酸分析儀檢測組胺、腐胺、尸胺、精胺、亞精胺和酪胺；

（2）根據GB/T?20195標準的規定制備試樣，粉碎后樣品可過孔徑0.45mm的篩；

（3）稱取步驟（2）中得到的待測樣品2-5?g（精確至0.0001g）置于100mL具塞三角瓶中，并加入25-100mL?1%磺基水楊酸溶液（加入液體時需邊加入邊震蕩，防止樣品團簇結塊），進行提取，然后靜置30min（也可以取部分液體于離心管中于4℃?10000r/min下離心10min）；提取方式可以是超聲常溫提取30min，也可以是震蕩提取60min；