[發明專利]雙位點嵌合巴氏桿菌PlpE抗原表位的兔出血癥病毒VP60重組抗原及其制備和應用

在審

• 申請號: 202110553190.X
• 申請日: 2021-05-20
• 公開（公告）號: CN113402615A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 朱偉峰;王芳;范志宇;胡波;魏后軍
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/866;A61K39/295;A61K39/12;A61K39/102;A61P31/04;A61P31/14
• 代理公司: 北京德崇智捷知識產權代理有限公司 11467
• 代理人: 王繹涵

本發明屬生物醫學技術領域，提供了一種雙位點嵌合了巴氏桿菌PlpE抗原表位的兔出血癥病毒VP60重組抗原，所述重組抗原通過在分析巴氏桿菌保護性抗原PlpE表位組成的基礎上，將PlpE表位集中分布的一段區域（長度合計70個氨基酸）分兩段嵌合展示到兔出血癥病毒VP60蛋白N端和C端而獲得。免疫保護力實驗表明該嵌合重組抗原對兔出血癥病毒和巴氏桿菌均具有良好的免疫保護力。本發明僅耗費一份人工就可以制備出針對兩種病原的抗原，簡化了工藝，縮短了制備時間，顯著降低了生產成本，為后期生產更低成本的兔病毒性出血癥、兔巴氏桿菌病疫苗提供了基礎。

技術領域

本發明屬生物醫學技術領域，具體涉及一種嵌合了巴氏桿菌抗原表位的兔出血癥病毒VP60重組抗原及其制備方法和應用。

背景技術

兔病毒性出血癥，俗稱兔瘟，是由兔出血癥病毒( Rabbit hemorrhagic diseasevirus，RHDV) 引起的一種具有高度傳染性、高發病率、高致死性的疾病，主要發生于 2 月齡以上成年兔。RHDV 衣殼蛋白 VP60 由 579 個氨基酸組成，是病毒衣殼組成的最基本單位。衣殼蛋白 VP60 是病毒的免疫保護性抗原，與誘導機體抗感染免疫直接相關，單獨表達VP60蛋白能夠自聚成病毒樣顆粒，由其制成的疫苗已經用于兔病毒性出血癥的預防。

兔巴氏桿菌病（Pasteurellosis）是主要由多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida）引起的一種危害養兔業的主要細菌性疫病。各種年齡、品種的家兔對于多殺性巴氏桿菌均易感，尤其2-6月齡的家兔易感染發病，該病是造成9周齡到6月齡家兔死亡的主要疫病之一。目前已經有PlpE等保護性抗原報道，動物實驗顯示出良好的免疫保護效力。

目前已經有兔病毒性出血癥、兔巴氏桿菌病二聯滅活疫苗用于同時防控兔病毒性出血癥和兔巴氏桿菌病。但是該疫苗存在著生產成本偏高等、對巴氏桿菌病的免疫保護效果并不理想等問題。傳統兔病毒性出血癥、兔巴氏桿菌病二聯滅活疫苗的制備工藝是先分別制備兔病毒性出血癥、兔巴氏桿菌滅活疫苗，再進行物理混合制成聯苗。這種二聯苗的生產過程需要經歷兩個疫苗的生產過程，耗費兩份人工及物料、水電等，增加了生產成本。雖然近年來有使用基因工程亞單位疫苗（以VP60和PlpE等為抗原）取代傳統細菌或病毒滅活疫苗的趨勢，但是目前基因工程二聯亞單位疫苗的生產工藝依然需要經歷分別制備單苗然后物理混合的過程，生產成本并未顯著降低。因而將不同抗原及其表位嵌合連接在一起構成新抗原的方案正成為新的聯苗發展方向，這將使二聯疫苗生產過程簡化，有效降低生產成本。

本發明的目的是將巴氏桿菌保護性抗原PlpE的表位嵌合展示到兔出血癥病毒VP60上，從而獲得一種新的兔病毒性出血癥、兔巴氏桿菌病二聯亞單位疫苗所需抗原。

發明內容

本發明所解決的技術問題是：通過構建嵌合有巴氏桿菌保護性抗原PlpE抗原表位的兔出血癥病毒VP60重組蛋白抗原，獲得一種只耗費一份人工就能夠生產出對兔出血癥病毒和巴氏桿菌都具有免疫保護作用的重組蛋白抗原，從而應用于兔病毒性出血癥、兔巴氏桿菌病二聯疫苗制備

為了解決上述技術問題，本發明提供一種雙位點嵌合了巴氏桿菌PlpE抗原表位的兔出血癥病毒VP60重組抗原，所述重組抗原包括兔出血癥病毒VP60蛋白，且其N端和C端分別連接了PlpE up多肽片段和PlpE down多肽片段；其中，PlpE up多肽片段和PlpE down多肽片段源自巴氏桿菌PlpE蛋白抗原表位。

所述VP60蛋白N端和C端所嵌入的PlpE抗原表位氨基酸序列分別為SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。

編碼所述VP60蛋白N端和C端所嵌入的PlpE抗原表位核苷酸序列分別為SEQ IDNO:3和SEQ ID NO:4。