[發明專利]一種靶向腫瘤的端粒酶檢測系統、端粒酶檢測方法及試劑盒

有效

• 申請號: 202110551808.9
• 申請日: 2021-05-20
• 公開（公告）號: CN113201579B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發明（設計）人: 徐曉文;張芮源
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C12Q1/6816
• 分類號: C12Q1/6816;C12Q1/48;C12N15/11
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 李箏

1.一種靶向腫瘤的端粒酶檢測系統，其特征在于，所述檢測系統為DNA四面體，所述DNA四面體其中一對頂點具有DNA三鏈體，另一對頂點具有DNA雙鏈體；

所述DNA三鏈體由發夾DNA鏈及端粒酶引物鏈組成；所述DNA雙鏈體中熒光劑標記的長鏈及淬滅劑標記的短鏈部分雜交；

所述DNA三鏈體中，所述三鏈體中TAT堿基對含量占所述三鏈體中三堿基對含量的70％；所述發夾DNA鏈為DNA四面體組成核苷酸鏈在頂點處的自身回折；所述端粒酶引物鏈包括兩部分，其5’端為發夾DNA鏈的互補鏈，3’端為端粒酶的引物序列；所述端粒酶的引物序列為AATCCGTCGAGCAGAGTT；

所述DNA雙鏈體中，所述長鏈為DNA四面體核苷酸鏈延伸出DNA四面體的部分，所述延伸部分包括與短鏈的互補端及暴露的立足點，所述立足點長度為4～6個堿基。

2.如權利要求1所述靶向腫瘤的端粒酶檢測系統，其特征在于，所述立足點長度為5個堿基。

3.如權利要求1所述靶向腫瘤的端粒酶檢測系統，其特征在于，所述靶向腫瘤的端粒酶檢測系統的制備方法，將四面體DNA，SD鏈和HTS鏈的單鏈寡核苷酸加入緩沖液中混合，將混合體系加熱后迅速冷卻；

SD鏈的序列如SEQ ID NO:5所示；

HTS鏈的序列SEQ ID NO:12；

所述DNA四面體中D1，D2，D3，D4，SD鏈和HTS鏈以1：1：1：1：2：2的摩爾比進行混合；

D1鏈的序列如SEQ ID NO:1所示；D2鏈的序列如SEQ ID NO:2所示；D3鏈的序列如SEQID NO:3所示；D4鏈的序列如SEQ ID NO:4所示；

所述D1至D4代表DNA四面體組成的寡核苷酸，SD代表淬滅劑標記的短鏈，HTS表示端粒酶引物鏈。

4.如權利要求3所述靶向腫瘤的端粒酶檢測系統，其特征在于，所述加熱的溫度為90～100℃，加熱時間為2～4min；

或，所述緩沖液為TM緩沖液，其中Tris濃度為15～25mM，MgCl₂濃度為45～55mM。

5.如權利要求3所述靶向腫瘤的端粒酶檢測系統，其特征在于，將混合體系加熱并在95℃下保持3分鐘，反應結束后將混合體系加入冰水浴中迅速冷卻至溫度降至4℃。

6.如權利要求3所述靶向腫瘤的端粒酶檢測系統，其特征在于，所述制備方法中，還包括驗證步驟，將退火后的組件通過聚丙烯酰胺凝膠電泳，通過泳道中條帶的遷移速率判斷是否合成所述端粒酶檢測系統。

7.一種腫瘤診斷試劑盒，其特征在于，所述腫瘤診斷試劑盒中包括權利要求1-6任一項所述靶向腫瘤的端粒酶檢測系統。

8.一種體外篩選抗腫瘤活性成分的方法，其特征在于，所述方法包括采用權利要求1-6任一項所述靶向腫瘤的端粒酶檢測系統對腫瘤模型中的端粒酶含量進行檢測。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，所述檢測方法包括以下步驟：獲取待篩選化合物處理后的腫瘤模型，與權利要求1-6任一項所述靶向腫瘤的端粒酶檢測系統共孵育后對其熒光強度進行檢測。