[發明專利]葡苷寡糖及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110550204.2
• 申請日: 2021-05-20
• 公開（公告）號: CN113337557B
• 公開（公告）日: 2022-11-15
• 發明（設計）人: 周中凱;肖長昊
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12P19/14
• 分類號: C12P19/14;C12N9/24;C12N1/20;A61K31/702;A61P3/04;C12R1/07
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司 12107
• 代理人: 楊歡

1.一種葡苷寡糖的制備方法，其特征在于，包括下述步驟：

水解：分別稱量下述質量份組分：瓜爾豆膠1%，刺槐豆膠0.8%，魔芋粉1%放到不銹鋼高速攪拌反應罐里，加入96.2%的水進行溶解；加入1%的葡甘低聚糖酶液，充分水解設置參數45°C，180 r/min，4 h；

滅酶：將水解結束的液體不銹鋼高速攪拌反應罐中進行滅酶處理，設置參數121°C，20min；

脫色：向滅酶后的液體中加入0.1%食用級活性炭，進行脫色處理，設置參數180 r/min，1 h；

過濾：使用過濾機，獲得寡糖清液；

濃縮：使用多效濃縮機，三效濃縮，將清液濃縮為15%的濃縮液；

噴霧干燥：使用噴霧干燥機將上清液用噴霧干燥機噴成粉末，收取粉末，進風的溫度為180°C；

檢驗包裝：人工檢驗粉末顆粒的理化性質并用粉末包裝機進行包裝，每500 g包一小包裝，每10小包裝包一大包裝；

其中，所述的葡甘低聚糖酶液采用下述方式制備：

(1)淀粉芽孢桿菌的培養；

培養基的制備：稱取下述質量份組分：蛋白胨1%，牛肉膏3%，氯化鈉0.5%，瓊脂1.5%，蒸餾水94%；將蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉置于三角瓶中并加入94%蒸餾水；經混勻后用1 mol/L的氫氧化鈉調節pH至7.2–7.4，最后加入稱量好的瓊脂，混勻備用；

種子培養基的制備：稱取下述質量份組分：無水葡萄糖1%，酵母粉0.3%，麥芽汁提取粉0.3%，胰蛋白胨0.5%，蒸餾水97.9%，混勻；裝入三角瓶中，每瓶600 mL，備用；將上述配制好的培養基與事先準備好的20支15×150 mm規格的試管，用報紙包好后，121°C-122℃，20min，備用；

菌的培養：

將滅完菌的完全培養基和含有種子培養基的試管放到超凈臺內，紫外照射10 min；關閉紫外燈，把完全培養基倒入試管中，每個試管倒1/3，側倒，使其呈斜面冷卻凝固；把4°C冰箱中的菌種K018在37°C，30 min培育箱里活化；用接種用的環挑起菌種接種到斜面培養基上，劃“之”字型；之后放到培育箱中，斜面培養，37°C，24 h；

（2）葡甘低聚糖酶液獲取：

用接種環把菌種緩慢地轉移到90 ml種子的接種環中養基的三角瓶中，放入氣浴搖床上，30°C，200 r/min，20 h；然后，在火焰圈的作用下迅速將培養液倒入事先已配制好的種子培養液的種子發酵罐中，設定參數30°C，20 h；原培養液與罐內配制的種子培養液比例為1：9；

配制發酵培養基：稱取下述質量含量組分：稱取葡萄糖3.8%，磷酸氫鉀0.2%，硫酸鎂0.1‰，硫酸銨0.8‰，酵母粉0.9%，置于發酵液發酵罐中，加入95%的蒸餾水，開動攪拌器混勻；用1mol/L的氯化鈉調節pH至7.5，開動攪拌器混勻；

取種子發酵罐中的培養液加入到發酵液發酵罐中，種子液與發酵液的比例為1：9，設定參數30°C，72 h；

過濾：使用過濾機，獲得清液，過濾機事先滅菌；

酶液冷存：將過濾后的酶液放到儲液罐中4°C儲存。