[發明專利]一種抗CIB單鏈抗體及其篩選方法和應用

有效

• 申請號: 202110546840.8
• 申請日: 2021-05-19
• 公開（公告）號: CN113372448B
• 公開（公告）日: 2022-09-23
• 發明（設計）人: 王選年;郭東光;李文明;岳鋒;孫國鵬;李鵬;芐爽麗;朱艷平;潘鵬濤;齊永華
• 申請（專利權）人: 新鄉學院
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;C12N15/13;C12N15/70;G01N33/53
• 代理公司: 西安正華恒遠知識產權代理事務所(普通合伙) 61271
• 代理人: 傅曉

本發明公開了一種抗CIB單鏈抗體及其篩選方法和應用。該單鏈抗體的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；編碼該單鏈抗體的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本發明利用抗體基因工程技術和噬菌體展示技術構建CIB鼠源免疫噬菌體單鏈抗體庫，從中篩選出CIB的ScFv，為后期建立CIB的免疫學快速檢測方法提供理論依據和物質基礎。

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，具體涉及一種抗CIB單鏈抗體及其篩選方 法和應用。

背景技術

目前，檢測西布特羅殘留的方法主要集中于液相色譜-質譜聯用(Liquidchromatography-massspectrometry,LC-MS)、氣相色譜-質譜聯用(Gaschromatography-massspectrometry,GC-MS)、毛細管電泳(Capillaryelectrophoresis,CE)等方法。以上方法均為儀器確證法，檢測的精度 和準確度十分可靠，但由于以上方法均存在儀器貴、操作繁鎖、需專業人員等 問題，難以滿足日常化快速檢測的要求。基于抗原抗體特異性識別反應的免疫 化學篩選法則可以滿足日常化快速檢測的要求，該方法的核心是必須獲得穩定、 特異、靈敏的抗體。目前關于西布特羅抗體鮮有報道，因此開發CIB抗體對構 建和完善我國藥物殘留檢測體系具有重要意義。

發明內容

針對現有技術中的上述不足，本發明提供一種抗CIB單鏈抗體及其篩選方 法和應用，開發得到的抗CIB單鏈抗體具有優異的特異性和靈敏度，能夠用于 CIB的免疫學檢測的構建。

為實現上述目的，本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種抗CIB單鏈抗體，該單鏈抗體的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

進一步地，單鏈抗體的輕鏈可變區和重鏈可變區通過連接多肽連接。

進一步地，連接多肽的基因為編碼3組重復Gly₄Ser的核苷酸序列。

一種編碼上述抗CIB單鏈抗體的基因，該基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2 所示。

一種表達載體，包括上述核苷酸。

一種CIB抑制劑，包括上述抗CIB單鏈抗體。

一種噬菌體，該噬菌體可表達上述基因。

上述抗CIB單鏈抗體在CIB免疫學檢測中的應用。

一種用于進行CIB免疫學檢測的試劑盒，包括上述抗CIB單鏈抗體。

一種篩選上述抗CIB單鏈抗體的方法，包括以下步驟：

(1)構建CIB完全抗原；

(2)提取經CIB完全抗原免疫后的樣本RNA，然后PCR擴增分別得到輕 鏈可變區基因和重鏈可變區基因，再用連接片段連接；

(3)將步驟(2)所得基因克隆至載體中，然后轉化至大腸桿菌內，經噬 菌體拯救后獲得CIB噬菌體單鏈抗體庫，然后通過制備得到的完全抗原篩選得 到該抗CIB單鏈抗體。

進一步地，步驟(3)篩選過程中使用含有過量載體蛋白的TBS作為CIB 噬菌體單鏈抗體庫的稀釋液。

進一步地，步驟(3)中所用載體為噬菌粒載體pCANTAB5E，其在單鏈抗 體與PIII蛋白之間存在琥珀型止子TAG。

本發明的有益效果：

1、本發明利用抗體基因工程技術和噬菌體展示技術構建CIB鼠源免疫噬菌 體單鏈抗體庫，從中篩選出CIB的ScFv，為后期建立CIB的免疫學快速檢測方 法提供理論依據和物質基礎。