[發明專利]鑒定肺結節狀態的方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202110546682.6
• 申請日: 2021-05-19
• 公開（公告）號: CN113278692A
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發明（設計）人: 徐春葉;李明明;蒲玨
• 申請（專利權）人: 北京艾克倫醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/113
• 代理公司: 北京慧誠智道知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11539
• 代理人: 李楠

本文提供了一種在受試者中鑒定肺結節狀態的方法，其包括：1)檢測來自所述受試者的生物樣品中生物標志物基因的甲基化水平和/或miRNA的表達水平，其中所述生物標志物基因包括PTGER4、RASSF1A和SHOX2基因，所述miRNA包括miR?19b和miR?320a；以及2)將步驟1)檢測的甲基化水平與群體中相應生物標志物的正常甲基化水平進行比較，和/或將步驟1)檢測的miRNA的表達水平與相應miRNA的正常表達水平進行比較，以鑒定所述受試者的肺結節狀態。本文還提供了用于鑒定受試者中肺結節狀態的試劑盒。本文所提供的方法和試劑盒為肺結節良惡性鑒別，肺癌的預測、診斷、和評估提供了一條快速、可靠、準確的新途徑。

技術領域

本文涉及在受試者中鑒定肺結節狀態的方法和試劑盒，尤其是利用生物標志物基因的甲基化水平和/或miRNA的表達水平來鑒定肺結節狀態的方法和試劑盒。

背景技術

肺癌是全世界發病率、死亡率最高的惡性腫瘤，是威脅人類生命和健康的重大疾病。2014年世界衛生組織國際癌癥研究署(IARC)發布的世界癌癥報告顯示：全球癌癥負擔在不斷的加重，其中2012年新發常見癌癥中肺癌居首，約為180萬例，占常見癌癥總數的13％；在常見死亡癌癥中，肺癌也居首位，約為160萬例，占總數的19.4％。在前十位發病率較高的癌癥中，肺癌在男性中的發病率居首，占23％，女性中發病率占14.85％，僅次于乳腺癌的16.97％。另外肺癌的死亡率在男性和女性中也均居榜首，男性中占29.50％，女性約為23.89％。

肺癌的預后較差，并且發現時大多為中晚期。如果能在早期發現并采用一定的有效治療方法即可大大降低肺癌的死亡率。雖然近幾年來肺癌在診斷、手術治療及研究等方面取得了一系列的進展，但是其五年生存率始終保持在較低的16％。其原因為患者往往在疾病的晚期才發現因而喪失了最佳的治療時機。國外研究發現Ⅰ期的非小細胞肺癌患者在接受了根治性手術治療后，其5年的生存率可達到58％-73％，然而目前僅有15％的患者能在早期發現。這說明若要提高肺癌患者的預后主要在于提高肺癌患者的早期診斷效率。

目前，肺癌的診斷主要依靠影像學、痰脫落細胞學及支氣管鏡活檢等技術，這些診斷技術并沒有在很大程度上降低肺癌患者的死亡率，因此，如何提高肺癌患者的生存率，依賴于肺癌的早期診斷，篩選和挖掘有價值的早期肺癌的生物學標志物成為亟待解決的問題。利用一些腫瘤標志物，例如CEA(癌胚抗原)，鑒別良惡性腫瘤診斷準確率也只有48％。由于影像學技術在肺癌早期篩查中未能顯示出良好的效果，人們開始將目光轉移向肺癌早期診斷的分子標志物，遺憾的是迄今為止沒有發現一個敏感性和特異性較高的分子標志物。近年來肺癌表觀遺傳學研究進展較快，特別是DNA甲基化，研究發現在肺癌發生的早期就存在很多特有的腫瘤相關基因出現不同程度的甲基化狀態改變，為肺癌早期診斷標志物的探索提供了新的契機。

miRNA在生物學上作用于轉錄后階段，是表觀遺傳學的主要因子之一。其作為早期癌癥的標記物，在早期癌癥的診斷上有靈敏度的優勢，I期肺癌的靈敏度可達80-98％。miRNA是一類內生的、長度約19-25個核苷酸的小RNA，在胚胎發育、細胞分化和器官生成等重要過程中承擔著關鍵性的調控功能。因此，監測miRNA標記物在腫瘤發生、發展中的作用，是其作為腫瘤診斷、預后標志物及治療靶點的基礎。外周血中miRNA是理想的無創液體活檢的靶標，可以實現對患者的早期診斷，便于進行動態連續監測。