[發明專利]一種以分子圖像方式定量組織內內源性代謝物的質譜方法

有效

• 申請號: 202110542665.5
• 申請日: 2021-05-18
• 公開（公告）號: CN113588768B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發明（設計）人: 蘭春燕;王磊;張晶;李海南;蔡林波;馬旭
• 申請（專利權）人: 國家衛生健康委科學技術研究所;王磊;張晶;李海南;蔡林波;蘭春燕
• 主分類號: G01N27/64
• 分類號: G01N27/64
• 代理公司: 北京盈權知識產權代理事務所(普通合伙) 16022
• 代理人: 路傳亮

本申請提供了一種以分子圖像方式定量組織內內源性代謝物的質譜方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：(1)模擬組織模型的選擇；(2)標準品的添加；(3)配制基質并加入內標。本申請的方法使用N?(1?萘基)乙二胺二鹽酸鹽作為基質，¹³C作為內標檢測腦膠質瘤組織中的2?羥基戊二酸在靈敏度，特異性和檢測限上取得了良好的效果。

技術領域

本發明屬于醫學檢測和質譜檢測領域，具體地，本申請提供了一種定量組織內內源性代謝物的質譜方法，包括以下步驟：(1)模擬組織模型的選擇；(2)標準品的添加；(3)配制基質并加入內標；其使用N-(1-萘基)乙二胺二鹽酸鹽作為基質，¹³C作為內標定量檢測腦膠質瘤組織中的2-羥基戊二酸。

背景技術

在多種癌癥中發現異檸檬酸脫氫酶(isocitrate dehydrogenase，IDH)基因突變，包括膠質瘤，急性髓系白血病，前列腺癌，甲狀腺癌，結腸癌，軟骨肉瘤，膽管癌，黑色素瘤及副神經節瘤等。已知IDH基因突變會將α-酮戊二酸(α-Ketoglutarate，α-KG)還原為2-羥基戊二酸(2-Hydroxyglutarate，2-HG)，從而導致組織內致癌代謝產物2-HG的積累。高水平的2-HG已被證明抑制依賴α-KG的雙加氧酶包括組蛋白和DNA去甲基酶的活性，通過影響染色質結構而促進癌癥的發生和發展。2-HG在正常細胞中天然水平很低，而IDH基因突變后會導致2-HG含量明顯增加，因此可通過檢測2-HG這一致癌代謝產物來評估IDH基因突變與否，進而輔助臨床進行精準診斷和個性化治療。

現有的2-HG檢測方案包括生化法，磁共振波譜法及質譜法等，其中質譜法主要包括常壓質譜法，色譜質譜聯用的方法及基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜。生化法基本基于比色法或酶分析法，在分析前需要進行組織勻漿等冗雜耗時的樣本前處理過程；色譜質譜聯用的方法通量低，一次只能分析一例患者體內的2-HG的含量。磁共振波譜法雖能夠術前無創評估患者體內2-HG的含量，但成本高，需要復雜的數據后處理過程，如基線校正算法等。常壓質譜法雖能快速進行2-HG定性檢測，但在2-HG的定量檢測方面尚不能滿足臨床需求。

因此，本領域中仍然存在進一步改進2-HG定量檢測，特別是高靈敏度和準確度的質譜檢測方法的需求。

發明內容

申請人嘗試通過質譜成像法進行2-HG的二維絕對定量，突破了成像質譜定量難的困境，使用¹³C標記的同位素內標校正策略和質譜成像相結合的技術方法進行2-HG定量分析；實現了快速、精準絕對定量組織內2-羥基戊二酸的含量。

一方面，本申請提供了一種定量組織內內源性代謝物的質譜方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)模擬組織模型的選擇；

(2)標準品的添加；

(3)配制基質并加入內標；

(4)質譜檢測，繪制標準曲線并依據標準曲線計算代謝物水平。

進一步地，所述質譜方法為基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜。

進一步地，所述內源性代謝物為2-羥基戊二酸。

進一步地，所述組織為腫瘤組織，優選膠質瘤組織。

進一步地，模擬組織模型為肝臟組織。

進一步地，基質為1-5-DAN，9-AA，DHB，優選為N-苯基萘胺類化合物，更優選N-(1-萘基)乙二胺二鹽酸鹽。

另一方面，本申請提供了上述方法在檢測基因突變，優選異檸檬酸脫氫酶基因突變中的應用。

進一步地，所述內標為同位素內標，優選¹³C標記內標。

進一步地，上述方法或應用用于非診斷用途。