[發(fā)明專利]一種利用減壓進行外植體滅菌的方法

有效

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• 申請日: 2021-05-18
• 公開（公告）號: CN113179950B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃昌艷;張自斌;鄧杰玲;崔學(xué)強;狄清琳
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南寧市吉昌知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 45125
• 代理人: 滕藝瓊

本發(fā)明公開了一種利用減壓進行外植體滅菌的方法，包含以下操作步驟：(1)將外植體材料預(yù)處理；(2)二次減壓滅菌：消毒外植體材料，將其放入滅菌瓶內(nèi)，倒入氯化汞，抽真空減壓，3min后停止抽真空，使容器中通入空氣，5～8min后，再次進行抽真空減壓，7～11min后，停止抽真空，向容器中第二次通入空氣，8～16min后，容器內(nèi)壓力恢復(fù)正常，取出滅菌瓶，無菌水沖洗。本發(fā)明方法通過反復(fù)升壓降壓(減壓增壓)，外植體材料被徹底滅菌，相比傳統(tǒng)的滅菌方法，殺菌效果更好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種利用減壓進行外植體滅菌的方法。

背景技術(shù)

植物組織培養(yǎng)是20世紀初以植物生理學(xué)為基礎(chǔ)發(fā)展起來的一門新興技術(shù)，這項技術(shù)目前已在科研和生產(chǎn)中得到廣泛應(yīng)用，成為舉世矚目的生物技術(shù)重要內(nèi)容之一。植物組織培養(yǎng)的操作過程簡易，但是極易造成污染，因此操作人員需要嚴格按照標準來進行操作。植物組織培養(yǎng)發(fā)展至今，有較多的植物外植體滅菌的方式方法研究報道，主要集中在滅菌劑的選擇、滅菌的時間、滅菌的方法等方面的研究，很少涉及到外植體滅菌儀器的研究。現(xiàn)有技術(shù)的減壓滅菌技術(shù)滅菌效果不佳。因此，目前亟需一種滅菌效果較好的減壓滅菌方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對上述技術(shù)問題，發(fā)明一種利用減壓進行外植體滅菌的方法，旨在得到一種相較于傳統(tǒng)方法，效果更好滅菌方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：

一種利用減壓進行外植體滅菌的方法，包含以下操作步驟：

(1)將外植體材料預(yù)處理；

(2)二次減壓滅菌：用75％酒精消毒外植體材料，將其放入滅菌瓶內(nèi)，倒入0.1％氯化汞(加5～8滴吐溫)，開始計時，搖勻后放入容器中開始進行抽真空減壓，3min后停止抽真空，使容器中通入空氣，5～8min后，再次進行抽真空減壓，7～11min后，停止抽真空，向容器中第二次通入空氣，通過反復(fù)減壓增壓，外植體材料被徹底滅菌，8～16min后，容器內(nèi)壓力恢復(fù)正常，取出滅菌瓶，無菌水沖洗4次。

優(yōu)選地，步驟(1)中所述的外植體材料預(yù)處理為選擇2～3個月生長期、無病蟲害、健壯的外植體材料，用飽和洗衣粉水浸泡15min，期間不間斷晃動，清洗后在自來水下繼續(xù)沖洗30min。

優(yōu)選地，所述的外植體材料為茉莉莖段或大巖桐莖段。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

本發(fā)明方法通過反復(fù)升壓降壓(減壓增壓)，外植體材料被徹底滅菌，相比傳統(tǒng)的滅菌方法，殺菌效果更好。

附圖說明

圖1是本發(fā)明方法減壓滅菌示意圖。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖具體實施方式進行詳細描述，但應(yīng)當理解本發(fā)明的保護范圍并不受具體實施方式的限制。實施例中采用的原料、試劑若無特殊說明，皆為市售所得。

實施例中二次減壓滅菌采用的容器如圖1所示，由一個底托和密封罩組成；底托下通一根通氣管，通氣管一端將底托與密封罩形成的空間相連，另一端與真空泵相連，通氣管上設(shè)有一開關(guān)。

實施例1

一種利用減壓進行外植體材料外植體滅菌的方法，具體操作步驟如下：

(1)將茉莉枝條預(yù)處理：選擇2～3個月生長期、無病蟲害、健壯的茉莉枝條，剪切葉片，將枝條剪成帶腋芽的1.5cm長莖段，腋芽上部0.5cm，下部1.0cm，先用飽和洗衣粉水浸泡15min，期間不間斷晃動，清洗后在自來水下繼續(xù)沖洗30min；