[發明專利]一種用于羚牛防盜獵鑒定的引物及其應用

有效

• 申請號: 202110539206.1
• 申請日: 2021-05-18
• 公開（公告）號: CN113151504B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 李安寧;郭睿;李一丹;昝林森;馬征
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 王孝明

本發明提供了一種用于羚牛防盜獵鑒定的引物及其應用，包括Takin?F和Takin?R，具體序列為：Takin?F：5’?TTCTGCGATTCTGCTTCGTG?3’；Takin?R：5’?CCAGACCCGATGAACACCAG?3’。本發明的引物Takin?F和Takin?R用于鑒定羚牛肌肉組織特異性時采取熒光定量PCR法，提高了鑒定的靈敏性、特異性、精確性和鑒定速度。

技術領域

本發明屬于動物分子生物學技術領域，涉及羚牛防盜獵鑒定，具體涉及一種用于羚牛防盜獵鑒定的引物及其應用。

背景技術

羚牛(Budorcas taxicolor)為我國的一級保護動物，棲息于高海拔、高寒懸崖地段，體形較大，往往成為非法盜獵的目標，森林公安在繳獲盜獵羚牛酮體時，依賴傳統分類形態特征無法將其與牛、羊等區分，存在較大的局限性，依賴傳統分類形態特征鑒定羚牛不僅費時費力，而且常受主觀因素干擾，極易混淆出錯，除此之外，傳統的鑒定方法難以開展針對殘缺個體的鑒別。

發明內容

針對現有技術存在的不足，本發明的目的在于，提供一種用于羚牛防盜獵鑒定的引物及其應用，解決現有技術中羚牛防盜獵鑒定費時費力的技術問題。

為了解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案予以實現：

一種用于羚牛防盜獵鑒定的引物，包括Takin-F和Takin-R，具體序列為：

Takin-F：5’-TTCTGCGATTCTGCTTCGTG-3’；

Takin-R：5’-CCAGACCCGATGAACACCAG-3’。

本發明還保護一種如上所述的用于羚牛防盜獵鑒定的引物用于羚牛防盜獵鑒定的應用。

具體的，該應用為采用熒光定量PCR法，將Takin-F和Takin-R作為熒光定量 PCR擴增的引物，進行羚牛防盜獵鑒定。

具體的，熒光定量PCR法具體包括如下步驟：

步驟一，提取并保存羚牛肌肉組織總RNA；

步驟二，反轉錄PCR擴增：

取出步驟一中所述的羚牛肌肉組織總RNA，將羚牛肌肉組織總RNA去除基因組DNA后作為反轉錄PCR擴增的RNA模板，混合反轉錄PCR反應液，設定反轉錄PCR反應程序，進行反轉錄PCR擴增，得到cDNA混合液；

步驟三，熒光定量PCR擴增：

將步驟二中的cDNA混合液用水稀釋后，即得到熒光定量PCR擴增的cDNA 模板，分別制備實驗組熒光定量PCR反應液和內參組熒光定量PCR反應液，制備好的實驗組熒光定量PCR反應液和內參組熒光定量PCR反應液后，設定熒光定量 PCR反應程序，進行熒光定量PCR擴增，獲得相應的數據；

步驟四，將步驟三中獲得的數據進行處理和結果分析。

具體的，步驟一中，所述的提取羚牛肌肉組織總RNA的具體方法包括如下步驟：

步驟1.1，取出保存在-80℃的羚牛肌肉組織，加入1mL的Trizol裂解液和兩個鋼珠后，劇烈震蕩，使羚牛肌肉組織在Trizol裂解液中充分裂解，得到混合液 A；

步驟1.2，在步驟1.1中所述的混合液A中加入0.2mL氯仿，劇烈震蕩30s后，室溫孵育3min，得到混合液B；

步驟1.3，將步驟1.2中所述的混合液B在4℃，1200r/min的條件下離心15min，得到分層的混合液C，混合液C的上層清液中包含羚牛肌肉組織總RNA，中間層包含羚牛肌肉組織蛋白質，最下層包含氯仿；