[發明專利]一種通過流式細胞儀檢測細胞活性的方法

在審

• 申請號: 202110535732.0
• 申請日: 2021-05-17
• 公開（公告）號: CN113155712A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 周斌
• 申請（專利權）人: 上海軒鋒生物科技有限公司
• 主分類號: G01N15/14
• 分類號: G01N15/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種通過流式細胞儀檢測細胞活性的方法，包括獲取待檢測細胞活性的細胞，使用DPBS溶液重懸，400g離心5min；棄去上清，使用DPBS溶液重懸細胞到100ul；添加吖啶橙和溴化丙啶；取三只試管加入步驟2中的溶液樣本作為對照樣本；將獲得的實驗溶液樣本和對照樣本在室溫下孵育2min；在實驗溶液樣本中添加2ml DPBS溶液，離心5min，棄去上清；使用300ul DPBS溶液重懸樣本；使用流式細胞儀檢測樣本，調節補償，導出數據，并計算細胞活率。本方法使用雙熒光染色，流式細胞儀檢測的手段來檢測細胞活性，解決了部分未配備雙熒光細胞計數儀的實驗室無法進行細胞活性檢測的難題。

技術領域

本發明屬于細胞活性檢測技術領域，具體涉及一種通過流式細胞儀檢測細胞活性的方法。

背景技術

目前在進行細胞活性的實驗時，一般通過臺盼藍染色，血細胞計數板的方式來計算樣本細胞的絕對計數和活性評估；或者通過吖啶橙/溴化丙啶染料染色，雙熒光全自動細胞計數儀來讀取細胞的活性與數量。測試方法對雙熒光細胞計數儀依賴性很強，若實驗室內未配備雙熒光細胞計數儀則無法進行細胞活性檢測。

發明內容

本發明的目的在于提供一種通過流式細胞儀檢測細胞活性的方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種通過流式細胞儀檢測細胞活性的方法，具體包括以下步驟：

步驟1、獲取待檢測細胞活性的細胞，將得到的細胞使用DPBS溶液重懸，400g離心5min；

步驟2、靜置后棄去上清，使用DPBS溶液重懸細胞到100ul；

步驟3、添加吖啶橙和溴化丙啶；

步驟4、取三只試管加入步驟2中的溶液樣本作為對照樣本；

步驟5、將步驟3中獲得的實驗溶液樣本和對照樣本在室溫下孵育2min；

步驟6、在實驗溶液樣本中添加2ml DPBS溶液，離心5min，靜置后棄去上清；

步驟7、使用300ul DPBS溶液重懸樣本；

步驟8、使用流式細胞儀檢測樣本，調節補償，導出數據，并計算細胞活率。

優選的，所述步驟3添加吖啶橙到終濃度10ug/ml，添加溴化丙啶到終濃度為100ug/ml。

優選的，所述步驟1和步驟6的離心速度為400g。

優選的，所述步驟1-步驟7須在II級生物安全柜內操作，并嚴格遵守無菌操作。

優選的，所述步驟8中細胞活率的計算公式為：細胞活率＝1-(FITC和PE雙陽性細胞百分率/FITC陽性細胞百分率)。

本發明的技術效果和優點：使用雙熒光染色，流式細胞儀檢測的手段來檢測細胞活性，解決了部分未配備雙熒光細胞計數儀的實驗室無法進行細胞活性檢測的難題。

附圖說明

圖1為檢測樣本的前向側向散射光散點圖；

圖2為細胞樣本中AO/PI雙熒光散點圖(第四象限比例為活細胞)。

具體實施方式

實施例

一種通過流式細胞儀檢測細胞活性的方法，具體包括以下步驟，并對該方法進行驗證測試，其驗證測試結果如圖1和圖2所示：

步驟1、獲取待檢測細胞活性的細胞，將得到的細胞使用DPBS溶液重懸，離心5min；

步驟2、靜置后棄去上清，使用DPBS溶液重懸細胞到100ul；