[發明專利]一種厭氧微生物的純培養方法

在審

• 申請號: 202110534485.2
• 申請日: 2021-05-17
• 公開（公告）號: CN113151105A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 郭膘虎;劉倩;林輝;呂斯濠;文震
• 申請（專利權）人: 東莞理工學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20
• 代理公司: 北京華際知識產權代理有限公司 11676
• 代理人: 葉玉鳳;馮春回

本發明公開了一種厭氧微生物的純培養方法。包括以下步驟：步驟1：配制液體培養液，煮沸，滴加刃天青，分裝至細口管中，得到培養管；步驟2：通入N₂/H₂混合氣體，曝氣，迅速蓋緊橡膠塞；步驟3：將培養管置于高壓滅菌鍋內，高溫滅菌；轉移至超凈臺中紫外滅菌；步驟4：使用注射器將磁性抗氧化劑注入至培養管中，混勻；使用注射器將厭氧微生物種子液注入培養管中，放入恒溫培養箱中培養，得到厭氧微生物群。有益效果：(1)本發明無需利用厭氧培養箱，操作簡單便利；(2)本發明中磁性抗氧化劑不溶于液體培養液，不易被厭氧微生物吸收，不影響生長，且可以通過磁性分離，從而簡化厭氧微生物的分離，得到較純的厭氧微生物群。

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，具體為一種厭氧微生物的純培養方法。

背景技術

常見的厭氧微生物培養過程中，有發酵方式、多種微生物共培養方式，但都會存在分離問題。而純培養方式中，一般使用厭氧培養箱或厭氧培養罐來培養厭氧微生物，但該方式操作較復雜，較適合固體培養基培養，不適合液體培養基培養。目前，常見的液體培養基中，會預先加入還原劑如半胱氨酸、抗壞血酸等，來降低氧化還原電位，隔絕氧氣，從而形成厭氧環境，進行培養微生物。但是該方法，加入的還原劑量過多，溶解性較大，存在被微生物食用，影響厭氧微生物的生長；同時，該還原劑不易與微生物分離回收，影響最終微生物菌液的純度，造成培養廢液污染。

綜上，解決上述問題，制備一種可分離回收的抗氧化劑，用于降低氧化還原電位，形成一種厭氧微生物的純培養方法具有重要意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種厭氧微生物的純培養方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為了解決上述技術問題，本發明提供如下技術方案：

一種厭氧微生物的純培養方法，包括以下步驟：

步驟1：配制液體培養液，水浴加熱，滴加NaOH調節pH；煮沸，滴加刃天青，分裝至細口管中，得到培養管；

步驟2：將曝氣針插入培養管，通入N₂/H₂混合氣體，曝氣，迅速蓋緊橡膠塞；

步驟3：將培養管置于高壓滅菌鍋內，高溫滅菌；冷卻，放入恒溫培養箱中；轉移至超凈臺中紫外滅菌；

步驟4：使用注射器將磁性抗氧化劑注入至培養管中，混勻；使用注射器將厭氧微生物種子液注入培養管中，放入恒溫培養箱中培養，得到厭氧微生物群。

較為優化地，所述厭氧微生物為產乙酸嗜蛋白菌時，步驟1中，每升液體培養液中包括以下成分：5g多聚蛋白胨、5g胰蛋白胨、10g酵母浸膏、10g葡萄糖、0.96L蒸餾水、40mL微量元素原液；每升微量元素原液中包括以下成分：0.2g CaCl₂、0.4g MgSO₄·7H₂O、1.0gK₂HPO₄、1.0g KH₂PO₄、10.0g NaHCO₃、2.0g NaCl、1L蒸餾水。