[發明專利]一種ELISA試劑盒包被板用穩定劑及其制備方法、試劑盒包被板、試劑盒

有效

• 申請號: 202110528109.2
• 申請日: 2021-05-14
• 公開（公告）號: CN113267621B
• 公開（公告）日: 2021-12-17
• 發明（設計）人: 吳星亮;文晶亮;王亞玲
• 申請（專利權）人: 北京金諾百泰生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/53
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 孫銘偵

本申請涉及生物檢測技術領域，具體公開了一種ELISA試劑盒包被板用穩定劑及其制備方法、試劑盒包被板、試劑盒。ELISA試劑盒包被板用穩定劑包括水和如下質量百分比的組分：丙三醇5%?15%，海藻糖0.5%?1.5%，谷氨酸鈉0.005%?0.015%，硫氧還蛋白0.002%?0.008%；其制備方法為：S1:將丙三醇、海藻糖、谷氨酸鈉、水混合均勻，調節pH為7后制得混合液；S2:將硫氧還蛋白加入步驟S1中的混合液內混合均勻后即得。本申請的ELISA試劑盒包被板用穩定劑可用于ELISA試劑盒包被板的制備，其制作的ELISA試劑盒具有穩定性好、保存期長的優點。

技術領域

本申請涉及生物檢測技術領域，更具體地說，它涉及一種ELISA試劑盒包被板用穩定劑及其制備方法、試劑盒包被板、試劑盒。

背景技術

酶聯免疫吸附測定技術(ELISA)自20世紀70年代初問世以來，發展非常迅速，目前被廣泛應用于免疫學、醫學、生物學等諸多領域。ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。

ELISA試劑盒通常可以分為即用型和非即用型，常規即用型ELISA試劑盒的抗原包被板在制備過程中，一般經過包被、洗滌、封閉、洗滌、干燥五個步驟，但由于用于包被的抗原或抗體都為蛋白質，蛋白質具有生物活性，易受溫度及一些有機或無機物影響，出現失活、變性的情況，因此經上述步驟制備的ELISA試劑盒的保存期及數據測試的穩定性不理想。

發明內容

為了提高ELISA試劑盒的保存期和數據測試的穩定性，使ELISA試劑盒能夠長期儲存使用，本申請提供一種ELISA試劑盒包被板用穩定劑及其制備方法、試劑盒包被板、試劑盒。

第一方面，本申請提供一種ELISA試劑盒包被板用穩定劑，采用如下的技術方案：一種ELISA試劑盒包被板用穩定劑，包括水和如下質量百分比的組分：丙三醇5％-15％，海藻糖0.5％-1.5％，谷氨酸鈉0.005％-0.015％，硫氧還蛋白0.002％-0.008％。

通過采用上述技術方案，由于采用丙三醇，丙三醇含有大量的羥基，其自身比較穩定，丙三醇能在吸附在包被板上并在抗原表面上形成一層保護膜，保護抗原的蛋白結構，另外在后續的檢測步驟中還可以加速抗原抗體的沉積速度，增加酶標抗體與抗原的結合幾率。另外，海藻糖能夠與抗原的蛋白分子的結合水相互作用，表現出很好的保護功效。并且，谷氨酸鈉能夠提高抗原蛋白分子的持水力，提高其保水性，進一步維持抗原的生物活性。而硫氧還蛋白具有很好的熱穩定性，且分子量較低，分散性能好，其能夠分散嵌設在丙三醇保護膜和抗原蛋白分子之間，硫氧還蛋白通過半胖氨酸硫醇-二硫鍵交互促進其他蛋白還原，從而起到很好的抗氧化作用，硫氧還蛋白作為氫受體參與到氧化還原反應中，大大降低抗原被氧化破壞受損的幾率，硫氧還蛋白與海藻糖、丙三醇復配協同，對抗體或抗原起到很好的保護效果，大大延長了所制得的ELISA試劑盒的保存周期以及提高了ELISA試劑盒測試數據的穩定性。

優選的，一種ELISA試劑盒包被板用穩定劑，包括水和如下質量百分比的組分：丙三醇8％-12％，海藻糖0.7％-1.3％，谷氨酸鈉0.008％-0.012％，硫氧還蛋白0.003％-0.007％。

通過采用上述技術方案，按照上述比例復配的ELISA的穩定劑具有更佳的穩定效果，保持抗原的免疫活性，降低不同存放周期的ELISA試劑盒之間檢測結果的CV值，測試結果更加準確有效。

優選的，所述硫氧還蛋白為重組細菌硫氧還蛋白。

通過采用上述技術方案，重組細菌硫氧還蛋白對活性氧類物質具有更佳的清除作用，對超氧化陰離子、過氧化氫、游離羥基等有害物質交互作用，抑制其反應機理和活性，維持蛋白的氧化還原平衡環境。

優選的，所述硫氧還蛋白與丙三醇的質量比為1:(1000-3000)。