[發明專利]一種小兒肺咳顆粒HPLC指紋圖譜的構建方法

有效

• 申請號: 202110521719.X
• 申請日: 2021-05-13
• 公開（公告）號: CN113237974B
• 公開（公告）日: 2022-01-07
• 發明（設計）人: 田涵雯;黃青;陳革
• 申請（專利權）人: 長春人民藥業集團有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 長春眾邦菁華知識產權代理有限公司 22214
• 代理人: 于曉慶

1.一種小兒肺咳顆粒HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

a、供試品溶液的制備

稱取小兒肺咳顆粒，研細，稱取1～3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20～50ml，稱取重量，超聲處理20～40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液；

b、對照品溶液的制備

分別稱取蘆丁、甘草苷、橙皮苷、槲皮素、大黃酚、大黃素甲醚對照品，精密稱定，以甲醇為溶劑，配制成不同質量濃度的混合對照品溶液，過微孔濾膜，取續濾液作為對照品溶液；

c、測定

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5～15μl，注入高效液相色譜儀，記錄100分鐘內的色譜圖，用指紋圖譜軟件對圖譜進行處理，即得小兒肺咳顆粒的HPLC指紋圖譜；

步驟c中，測定的高效液相色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A，以0.05～0.5％磷酸溶液為流動相B，梯度洗脫，流速0.5～1.5ml/min，柱溫25～45℃，檢測波長210～360nm；理論塔板數按橙皮苷峰計算應不低于4000；

步驟c中，梯度洗脫過程中，流動相A、B的比例變化為：0～30min，5～15％A；30～45min，15～30％A；45～60min，30～35％A；60～80min，35～60％A；80～92min，60～80％A；92～100min，80～5％A。

2.根據權利要求1所述的一種小兒肺咳顆粒HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征在于，步驟a的具體步驟如下：

稱取小兒肺咳顆粒，研細，稱取2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱取重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

3.根據權利要求1所述的一種小兒肺咳顆粒HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征在于，步驟b的具體步驟如下：

分別稱取蘆丁、甘草苷、橙皮苷、槲皮素、大黃酚、大黃素甲醚對照品，精密稱定，置于同一10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取1ml置于同一10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質量濃度分別為0.0058mg/ml、0.0125mg/ml、0.0136mg/ml、0.0122mg/ml、0.0222mg/ml、0.0051mg/ml的混合對照品溶液，過0.45μm的微孔濾膜，取續濾液作為對照品溶液。

4.根據權利要求1所述的一種小兒肺咳顆粒HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征在于，步驟c的具體步驟如下：

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，記錄100分鐘內的色譜圖，用指紋圖譜軟件對圖譜進行處理，即得小兒肺咳顆粒的HPLC指紋圖譜。

5.根據權利要求1所述的一種小兒肺咳顆粒HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征在于，步驟c中，測定的高效液相色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱為：ACE5C18-AR 250×4.60mm；以乙腈為流動相A，以0.1％磷酸溶液為流動相B，梯度洗脫，流速1.0ml/min，柱溫30℃，檢測波長280nm；理論塔板數按橙皮苷峰計算應不低于4000。

6.根據權利要求1所述的一種小兒肺咳顆粒HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征在于，步驟c中，所得小兒肺咳顆粒的HPLC指紋圖譜共有24個共有峰，共有峰中8、9、13、19、23、24號色譜峰分別被指認為蘆丁、甘草苷、橙皮苷、槲皮素、大黃酚、大黃素甲醚。

7.根據權利要求6所述的一種小兒肺咳顆粒HPLC指紋圖譜的構建方法，其特征在于，步驟c中，按照標準指紋圖譜條件對所得小兒肺咳顆粒的HPLC指紋圖譜進行色譜峰歸屬，24個共有峰分別歸屬于黃芪、地骨皮、北沙參、麥冬、炙甘草、青蒿、桂枝、瓜蔞、紫菀、桑白皮、款冬花、陳皮、酒大黃、干姜、枸杞子十五味藥材；1號峰歸屬于地骨皮、北沙參、麥冬、炙甘草、瓜蔞、桑白皮、紫菀、酒大黃、枸杞子，2號峰歸屬于麥冬、炙甘草、瓜蔞、枸杞子，3號峰歸屬于酒大黃，4號峰歸屬于枸杞子，5號峰歸屬于桑白皮、款冬花，6號峰歸屬于款冬花、枸杞子，7號峰歸屬于桑白皮，8號峰歸屬于黃芪、炙甘草，9號峰歸屬于炙甘草、酒大黃，10號峰歸屬于炙甘草，11號峰歸屬于桑白皮、陳皮，12號峰歸屬于款冬花，13號峰歸屬于陳皮，14號峰歸屬于黃芪、青蒿、桑白皮、款冬花，15號峰歸屬于款冬花，16號峰歸屬于酒大黃，17號峰歸屬于陳皮，18號峰歸屬于桑白皮、酒大黃，19號峰歸屬于黃芪、桂枝、酒大黃，20號峰歸屬于枸杞子、21號峰歸屬于酒大黃，22號峰歸屬于酒大黃，23號峰歸屬于酒大黃，24號峰歸屬于酒大黃。