[發明專利]檢測多特異性抗體輕鏈錯配的方法

在審

• 申請號: 202110521522.6
• 申請日: 2015-04-01
• 公開（公告）號: CN113092788A
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: M·莫爾霍伊;M·柯尼格;V·拉瀨萊特;K·蒙坦;B·格倫瓦爾德
• 申請（專利權）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C12Q1/37
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 陳迎春;黃革生

1.多特異性抗體的蛋白質水解酶的限制性消化對分析多特異性抗體輕鏈配對的用途。

2.多特異性抗體的蛋白質水解酶的限制性消化對確定多特異性抗體中輕鏈錯配的用途。

3.重組哺乳動物細胞生產的多特異性抗體的蛋白質水解酶的限制性消化對選擇生產多特異性抗體的哺乳動物細胞的用途。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的用途，其中所述蛋白質水解酶選自Lys-C、Asp-N、Arg-C、Glu-C和胰凝乳蛋白酶。

5.根據權利要求4所述的用途，其中蛋白質水解酶是Lys-C。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的用途，其中所述孵育持續35至45分鐘。

7.根據權利要求6所述的用途，其中所述孵育持續約40分鐘。

8.根據權利要求1至7中任一項所述的用途，其特征在于，與蛋白質水解酶孵育的多特異性抗體是去糖基化的多特異性抗體。

9.根據權利要求1至8中任一項所述的用途，其中抗體與酶的重量比為約1：200。

10.根據權利要求1至9中任一項所述的用途，其中與蛋白質水解酶孵育的多特異性抗體具有從200至600μg/mL的濃度。

11.根據權利要求1至10中任一項所述的用途，其中所述多特異性抗體是單克隆多特異性抗體。

12.根據權利要求1至11中任一項所述的用途，其中所述多特異性抗體包含至少兩個非肽結合的輕鏈。

13.根據權利要求1至11中任一項所述的用途，其中所述多特異性抗體包含至少三個非肽結合的多肽。

14.一種用于確定多特異性抗體中輕鏈配對的方法，所述方法包括以下步驟：

a)將包含多特異性抗體的樣本與蛋白質水解酶孵育限定的時間，

b)通過質譜法鑒定由步驟a)的限制性蛋白水解消化獲得的片段的質量，和

c)從步驟b)的結果確定多特異性抗體的輕鏈配對。

15.一種用于確定多特異性抗體的輕鏈錯配的方法，所述方法包括以下步驟：

a)將包含多特異性抗體的樣本與蛋白質水解酶孵育限定的時間，

b)通過質譜法鑒定由步驟a)的限制性蛋白水解消化獲得的片段的質量，和

c)從步驟b)的結果確定多特異性抗體的輕鏈配對，從而確定輕鏈錯配。

16.一種用于選擇生產多特異性抗體的重組哺乳動物細胞的方法，所述方法包括以下步驟：

a)將包含一組重組哺乳動物細胞的一個重組哺乳動物細胞克隆群生產的多特異性抗體的樣本單獨地與蛋白質水解酶孵育限定的時間，所述一組重組哺乳動物細胞的所有細胞生成相同的多特異性抗體，

b)通過質譜法鑒定由步驟a)的限制性蛋白水解消化獲得的片段的質量，和

c)從步驟b)的結果確定每個克隆細胞群的多特異性抗體的輕鏈錯配的存在，和

d)基于步驟c)的結果選擇生產多特異性抗體的重組細胞。

17.根據權利要求14至16中任一項所述的方法，其中蛋白質水解酶選自Lys-C、Asp-N、Arg-C、Glu-C和胰凝乳蛋白酶。

18.根據權利要求17所述的方法，其中蛋白質水解酶是Lys-C。

19.根據權利要求14至18中任一項所述的方法，其中所述孵育持續35至45分鐘。