[發明專利]一種檢測樣品中一種或多種靶核酸的存在或其水平的方法

有效

• 申請號: 202110521332.4
• 申請日: 2021-05-13
• 公開（公告）號: CN113337579B
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發明（設計）人: 劉玲;黃麗華;柯榮秦
• 申請（專利權）人: 廈門先能生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6816
• 分類號: C12Q1/6816;C12Q1/6841;C12N15/11;C12Q1/6876
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 林遠成

1.一種檢測樣品中一種或多種靶核酸的存在或其水平的方法，所述方法包括：

(a)提供懷疑含有一種或多種靶核酸的檢測樣品，并且，針對每一種靶核酸，提供至少1個探針組，所述探針組包括第一探針、第二探針、鎖式探針和檢測探針；

其中，所述第一探針的序列包含：(i)與鎖式探針特異性結合的第一互補序列；(ii)與所述靶核酸特異性結合的第一靶結合序列；(iii)用于連接第一互補序列和第一靶結合序列的第一連接序列；其中，所述第一連接序列不與靶核酸或鎖式探針結合；

所述第二探針的序列從5’至3’方向包含：(i)與所述靶核酸特異性結合的第二靶結合序列；(ii)與鎖式探針特異性結合的第二互補序列；(iii)用于連接第二靶結合序列和第二互補序列的第二連接序列；其中，所述第二連接序列不與靶核酸或鎖式探針結合；

所述鎖式探針為單鏈核酸，其包含：(i)骨架序列和(ii)檢測探針序列；在允許雜交或退火的條件下，所述鎖式探針能夠與第一探針的第一互補序列以及第二探針的第二互補序列雜交或退火，形成帶有一個缺口的環狀多核苷酸；

所述檢測探針包含可檢測的標記和所述檢測探針序列或其片段；

(b)在允許連接酶連接核酸缺口的條件下，使所述檢測樣品與所述第一探針、第二探針和鎖式探針、連接酶接觸；

(c)在允許擴增的條件下，使用擴增酶對步驟(b)的產物進行滾環擴增；

(d)在允許雜交或退火的條件下，將前一步驟的產物與檢測探針接觸，并且，檢測與所述產物結合的檢測探針的信號；

(e)根據檢測探針的信號的存在或水平，確定檢測樣品中靶核酸的存在或其水平；

其中，所述第一探針的第一互補序列與所述鎖式探針的第一區域雜交，且所述第二探針的第二互補序列與所述鎖式探針的第二區域雜交，并且，所述第一區域與所述第二區域之間含有位于檢測探針序列內的間隔序列，所述間隔序列的長度為0-10nt；

其中，所述第一和第二靶結合序列的長度各自獨立地為12-50nt。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，提供至少2個，至少3個，至少5個，或更多個探針組。

3.根據權利要求1所述的方法，其中，所述第一靶結合序列位于所述第一互補序列的上游或者下游。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，所述第一靶結合序列與第二靶結合序列在所述靶核酸上間隔0nt。

5.根據權利要求1-4任一項所述的方法，所述方法具有選自下列的一個或多個特征：

(1)所述檢測樣品選自單細胞，細胞群，組織，器官，或其任何組合；

(2)所述細胞選自真核細胞，原核細胞，古細菌細胞，人工細胞，或其任何組合；

(3)所述靶核酸為DNA和/或RNA；

(4)所述可檢測標記選自熒光標記，生物發光標記，化學發光標記，同位素標記，或其任何組合；

(5)所述擴增酶為核酸聚合酶。

6.根據權利要求5所述的方法，其中，所述核酸聚合酶為DNA聚合酶。

7.根據權利要求5所述的方法，其中，所述核酸聚合酶為熱穩定的DNA聚合酶。