[發明專利]抗TIM3蛋白單克隆抗體及其細胞株、制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110517834.X
• 申請日: 2021-05-12
• 公開（公告）號: CN113234158B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 楊清海;陳惠玲;王小亞;周洪輝
• 申請（專利權）人: 福州邁新生物技術開發有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/68
• 代理公司: 福州市景弘專利代理事務所(普通合伙) 35219
• 代理人: 方圓;林祥翔

本發明涉及一種可以識別人TIM3抗原的單克隆抗體，分泌細胞株、其制備方法以及其在免疫檢測中的用途。上述技術方案化學合成TIM3蛋白C末端的178?201位氨基酸為抗原肽，偶聯KLH后得到免疫原。所述TIM3?KLH蛋白對小鼠進行免疫，經細胞融合、篩選和亞克隆，獲得高效分泌抗TIM3蛋白單克隆抗體的小鼠雜交瘤細胞株7H2,以及由該細胞株所分泌的抗TIM3蛋白單克隆抗體。本方案得到的抗體具有高特異性、敏感性，可以特異性識別表達TIM3蛋白的細胞，適用于免疫學檢測，特別是免疫組化檢測。

技術領域

本發明涉及生物醫學工程領域，特別涉及一種抗TIM3蛋白單克隆抗體及其細胞株、制備方法和應用。

背景技術

惡性腫瘤嚴重影響人類健康，目前腫瘤的治療手段包括放療、化療及分子靶向性治療。細胞免疫系統對腫瘤細胞的殺傷過程包括:腫瘤細胞的識別、腫瘤抗原被呈遞給T細胞、T細胞激活及特異性殺傷腫瘤細胞。在這個過程中，T細胞的激活需要協同刺激信號，而這些信號需要“免疫檢查點”的調控，“免疫檢查點”分子研究較多的有:T細胞免疫球蛋白黏液素3(TIM3)、細胞毒性T淋巴細胞抗原-4(CTLA-4)、程序性細胞死亡因子-1(PD-1)及其配體(PD-L1)等，它們在腫瘤微環境的免疫調節中起重要作用。

TIM3(T細胞免疫球蛋白黏液素3，T cell immunoglobulin and mucin-3)在2002年第一次被發現，TIM3是TIM家族成員，由301個氨基酸組成的Ⅰ型膜蛋白。TIM分子的共同結構包括:免疫球蛋白N末端可變區、黏蛋白結構域、跨膜區和胞內區。其胞外部分包括一個富含半胱氨酸的免疫球蛋白樣區域和一個黏蛋白區域(黏蛋白區富含蘇氨酸、絲氨酸和脯氨酸)，在免疫球蛋白可變區由4個半胱氨酸組成的高度保守的不同于其他免疫球蛋白超家族成員的獨特裂隙:它可以與磷脂酰絲氨酸(PS)結合。TIM3選擇性地表達在分泌IFN-γ的T輔助細胞(Th1和Th17)、T調控細胞(Treg)、樹突狀細胞(DCs)、單核細胞、肥大細胞、NK細胞、腫瘤浸潤性淋巴細胞(TILs)上，在腫瘤細胞上亦有表達，如黑色素瘤、胃癌、B細胞淋巴瘤。

發明內容

發明人提供了一種抗TIM3蛋白單克隆抗體，所述單克隆抗體的重鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；所述單克隆抗體輕鏈可變區的氨基酸序列為SEQID NO.5所示的氨基酸序列。

進一步地，所述單克隆抗體的重鏈可變區的DNA序列為SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述單克隆抗體的輕鏈可變區的DNA序列為SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

進一步地，所述單克隆抗體特異性識別TIM3蛋白。

進一步地，所述單克隆抗體為小鼠IgG₁亞型單克隆抗體。

進一步地，所述單克隆抗體由保藏號為CGMCC NO 20763的雜交瘤細胞株產生。

發明人又提供了一種抗TIM3蛋白單克隆抗體的制備方法，選取TIM3蛋白中SEQ IDNO.1所示的氨基酸序列(第178位至第201位),在其羧基端添加了一個半胱氨酸后，與載體蛋白KLH進行偶聯作為免疫原。

發明人還提供了一株分泌抗TIM3蛋白分子的雜交瘤細胞株，所述細胞株為小鼠雜交瘤細胞株7H2，所述細胞株已于2020年9月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC NO 20763，地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所。

發明人還提供了上述單克隆抗體在TIM3蛋白免疫檢測中的用途。

進一步地，所述免疫檢測包括免疫組織化學法，免疫印跡法和酶聯免疫法。