[發(fā)明專利]一株鏈霉菌突變菌及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110517764.8
• 申請日: 2021-05-12
• 公開（公告）號: CN113278545B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 章華偉;呂孫燕;唐宇琪;祝王婕;王鴻
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P17/16;C12R1/465
• 代理公司: 杭州天勤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 沈金龍

本發(fā)明公開了一株鏈霉菌突變菌及應(yīng)用。一株鏈霉菌突變菌，命名為鏈霉菌(Streptomyces sp.)，株號891?B6，保藏號為CGMCC No.21775。突變菌株891?B6是以鏈霉菌891為原始菌株經(jīng)過紫外誘變，通過形態(tài)篩選獲得。本發(fā)明所述的突變菌株891?B6發(fā)酵產(chǎn)物中金黃霉素A的含量比原始菌株發(fā)酵產(chǎn)物中金黃霉素A的含量高17.44％，本發(fā)明提供的突變菌株891?B6生產(chǎn)的金黃霉素中活性成分金黃霉素A含量高，非活性成分金黃霉素B的含量顯著降低，非活性成分金黃霉素C的含量穩(wěn)定不變。同時本發(fā)明提供的突變菌株891?B6遺傳穩(wěn)定性好，傳至三代產(chǎn)金黃霉素A水平與第一代相當(dāng)；能夠應(yīng)用于金黃霉素的工業(yè)化生產(chǎn)中。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一株鏈霉菌突變菌及應(yīng)用。

背景技術(shù)

金黃霉素(chrysomycin)是一類具有苯并萘吡喃酮結(jié)構(gòu)的苷類化合物，最早于1955年從鏈霉菌A-419株中發(fā)現(xiàn)，后來又從其他幾株鏈霉菌中分離得到。生物實驗表明，這些化合物具有顯著的抗噬菌體、抗菌和抗腫瘤活性。

近年來，研究表明，金黃霉素A(結(jié)構(gòu)式如式Ⅰ所示)對包括結(jié)核分枝桿菌在內(nèi)的耐藥病原體有較強(qiáng)的抑制作用而前期藥理研究表明，金黃霉素A對耐藥G⁺菌如耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)具有顯著的抗菌作用。因此，該先導(dǎo)化合物有很大潛力開發(fā)為治療耐藥病原體引起的感染性疾病的新型治療藥物。因此，作為藥物先導(dǎo)物之一的金黃霉素A在制藥工業(yè)中具有很大的應(yīng)用潛力，越來越多的化學(xué)家、生物學(xué)家和藥理學(xué)家等研究工作者開始關(guān)注金黃霉素類物質(zhì)。但是在金黃霉素產(chǎn)生菌的發(fā)酵過程中存在效價低、組分多等問題為后期規(guī)模化制備造成了昂貴的成本和分離的難度。

公開號為CN112574185A的發(fā)明公開了一種金黃霉素A的規(guī)模化分離純化方法。所述分離純化方法是將金黃霉素發(fā)酵液板框過濾后烘干得到干菌渣，粉碎后用有機(jī)溶劑超聲提取，提取液濃干后加入溶劑清洗水溶性雜質(zhì)，再加入二氯甲烷萃取，二氯甲烷萃取液脫色后抽濾，濾液濃干得金黃霉素A粗品，將其加入溶劑溶解后上制備色譜分離得到金黃霉素A純品。所述方法操作簡單，有機(jī)溶劑用量很少，避免了因使用大孔樹脂、硅膠或有機(jī)溶劑結(jié)晶而產(chǎn)生大量廢水和有機(jī)溶劑，且最終金黃霉素A的收率達(dá)到95％以上，獲得的金黃霉素A純品中金黃霉素A的含量在96％以上，純度在98％以上，更適合規(guī)模化生產(chǎn)，成本低，效益高。

該現(xiàn)有技術(shù)中使用鏈霉菌891發(fā)酵產(chǎn)金黃霉素，但是產(chǎn)生的金黃霉素是含有A、B、C三個組分的混合物，其對金黃色葡萄球菌起抑制作用的是金黃霉素A，因此要提高金黃霉素對金黃色葡萄球菌的抗菌作用，必須提高金黃霉素A的含量。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對上述存在的問題，如原始菌株組分多，后期分離成本高，金黃霉素A產(chǎn)量低等問題，提供一株鏈霉菌突變菌株及其應(yīng)用，所述突變菌株能夠生產(chǎn)發(fā)酵生產(chǎn)金黃霉素，且金黃霉素A含量高。

一株鏈霉菌突變菌，命名為鏈霉菌(Streptomyces sp.)，株號891-B6，于2021年1月25日保藏于位于北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所內(nèi)的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏編號為CGMCC No.21775。

本發(fā)明鏈霉菌突變菌株是由本實驗室從中國南海紅樹林沉積物分離得到的鏈霉菌891為原始菌株經(jīng)紫外線照射誘變篩選得到。

本發(fā)明又提供了所述的鏈霉菌突變菌在生產(chǎn)金黃霉素中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了一種生產(chǎn)金黃霉素的方法，使用所述鏈霉菌突變菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，再經(jīng)過純化獲得金黃霉素。

優(yōu)選的，發(fā)酵培養(yǎng)過程包括以下步驟：

步驟1，將所述鏈霉菌突變菌接入ISP₂瓊脂培養(yǎng)基活化6～7d，然后接種到ISP₂液體培養(yǎng)基種子培養(yǎng)后獲得種子液；