[發明專利]一種雙位點聯合注射6-OHDA和α-synuclein建立大鼠帕金森病模型的方法

有效

• 申請號: 202110515520.6
• 申請日: 2021-05-12
• 公開（公告）號: CN113229212B
• 公開（公告）日: 2023-01-13
• 發明（設計）人: 韓發彬;宋昊;魏傳飛;張男;陳清法
• 申請（專利權）人: 山東大學深圳研究院;聊城市人民醫院;山東大學第二醫院;山東中醫藥大學;山東美加賽培生物科技有限公司
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;A01K67/02
• 代理公司: 北京達友眾邦知識產權代理事務所(普通合伙) 11904
• 代理人: 徐銀輝

本發明公開了一種雙位點聯合注射6?OHDA和α?synuclein建立大鼠帕金森病模型的方法，該方法包括以下步驟：根據大鼠的腦定位圖譜獲得大鼠黑質的位點，兩位點坐標為：前囟后0.48cm，腦中線向右0.11cm，在硬腦殼表面下0.8cm；前囟后0.48cm，腦中線向右0.19cm，在硬腦殼表面下0.75cm兩位點處分別注射6?OHDA和AAV?α?synuclein。造模后四周對造模大鼠頭部皮下注射鹽酸阿樸嗎啡進行旋轉實驗檢測，大鼠向健康側旋轉并轉圈數大于200r/30min,即為造模成功。轉圈數小于規定數值即認為造模失敗。本發明選取了黑質較大位置，采用兩個位點不同深度注射藥物可較好的損傷黑質的多巴胺神經元。可提高造模成功率，造模四周達到90％以上的成功率。目前報道的其他位點的成功率一般都低于80％，提高了造模成功率。

技術領域

本發明涉及一種建立大鼠帕金森病模型的方法，具體涉及一種雙位點聯合注射6-OHDA和α-synuclein建立大鼠帕金森病模型的方法，屬于生物學領域。

背景技術

帕金森氏病(Parkinson’s disease,PD)是繼老年性癡呆(Alzheimer’sDisease)后的第二大神經退行性疾病，在65-69歲的老年人群中發病率約占0.5％-1％，在80歲以上的老年人中發病率能達到1％-3％。PD的主要病理改變是中腦多巴胺能神經元中發生變性蛋白聚集小體(LewyBodies)導致多巴胺能神經元凋亡，在臨床上引起靜止性震顫，運動遲緩，肢體僵硬及步態不穩及其它非運動癥狀。嚴重影響患者的生活治療，并且導致沉重的醫療負擔。

雖然近些年來，隨著對帕金森病研究的深入，已有一些治療方法能夠減輕疾病的某些癥狀，但是都達不到徹底治愈的目的，目前的治療實質上主要是提高病人的生活質量和工作能力。在帕金森病的各種治療方法中仍以藥物治療為主。但是目前沒有根治帕金森病的藥物，且隨著患病時間的延長病情逐漸加重。因此，更深入的研究PD的發病機制和治療方法很有必要，而穩定高效的動物模型是深入研究該疾病的前提。

目前較為公認的建立PD模型的方法主要有兩種：一種是應用6-羥基多巴胺(6-OHDA)注入黑質紋狀體系統來損毀大鼠黑質紋狀體系統DA能神經元所制成的模型；另一種是運用MPTP制備猴等靈長類動物模型和C57B小鼠PD模型，因為大鼠相對靈長類成本低，樣本數量不受限制；又比小鼠體積大、相對容易定位，所以很多學者選擇注射6-OHDA于大鼠腦內建立PD動物模型。

6-OHDA與多巴胺受體只差一個羥基，可形成自由基，是一種神經毒素，能夠抑制線粒體氧化呼吸鏈復合物I并激活caspase而啟動了細胞凋亡過程，從而選擇性的損毀DA能神經元。DA能神經元投射有兩條通路：即黑質－紋狀體通路和新邊緣系統通路，前者是黑質與紋狀體相連接，后者是中腦腹側背蓋區與紋狀體相聯系。已往很多報道選擇通路中的黑質致密部、內側前腦束、紋狀體、中腦腹側背蓋區的一個或兩個位點進行PD造模，但由于黑質致密部、內側前腦束、紋狀體和中腦腹側背蓋區的不同位點的選擇對PD造模的成功率影響很大，目前已報道的PD造模成功率多在80％以下，嚴重制約了對PD發病機制和治療方法的研究。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種雙位點聯合注射6-OHDA和α-synuclein建立大鼠帕金森病模型的方法，可以得到早期帕金森癥狀的動物模型，采用本發明的制備方法，造模四周的成功率在90％以上，具有造模成功率高，造模時間短等優點。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種雙位點聯合注射6-OHDA和α-synuclein建立大鼠帕金森病模型的方法，其步驟如下：

將大鼠經腹腔注射麻醉劑后，固定于腦立體定位儀上。