[發(fā)明專利]一種雙位點(diǎn)聯(lián)合注射6-OHDA和α-synuclein建立大鼠帕金森病模型的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110515520.6
• 申請(qǐng)日: 2021-05-12
• 公開（公告）號(hào): CN113229212B
• 公開（公告）日: 2023-01-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓發(fā)彬;宋昊;魏傳飛;張男;陳清法
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)深圳研究院;聊城市人民醫(yī)院;山東大學(xué)第二醫(yī)院;山東中醫(yī)藥大學(xué);山東美加賽培生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A61K49/00
• 分類號(hào): A61K49/00;A01K67/02
• 代理公司: 北京達(dá)友眾邦知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11904
• 代理人: 徐銀輝

本發(fā)明公開了一種雙位點(diǎn)聯(lián)合注射6?OHDA和α?synuclein建立大鼠帕金森病模型的方法，該方法包括以下步驟：根據(jù)大鼠的腦定位圖譜獲得大鼠黑質(zhì)的位點(diǎn)，兩位點(diǎn)坐標(biāo)為：前囟后0.48cm，腦中線向右0.11cm，在硬腦殼表面下0.8cm；前囟后0.48cm，腦中線向右0.19cm，在硬腦殼表面下0.75cm兩位點(diǎn)處分別注射6?OHDA和AAV?α?synuclein。造模后四周對(duì)造模大鼠頭部皮下注射鹽酸阿樸嗎啡進(jìn)行旋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)檢測，大鼠向健康側(cè)旋轉(zhuǎn)并轉(zhuǎn)圈數(shù)大于200r/30min,即為造模成功。轉(zhuǎn)圈數(shù)小于規(guī)定數(shù)值即認(rèn)為造模失敗。本發(fā)明選取了黑質(zhì)較大位置，采用兩個(gè)位點(diǎn)不同深度注射藥物可較好的損傷黑質(zhì)的多巴胺神經(jīng)元。可提高造模成功率，造模四周達(dá)到90％以上的成功率。目前報(bào)道的其他位點(diǎn)的成功率一般都低于80％，提高了造模成功率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種建立大鼠帕金森病模型的方法，具體涉及一種雙位點(diǎn)聯(lián)合注射6-OHDA和α-synuclein建立大鼠帕金森病模型的方法，屬于生物學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

帕金森氏病(Parkinson’s disease,PD)是繼老年性癡呆(Alzheimer’sDisease)后的第二大神經(jīng)退行性疾病，在65-69歲的老年人群中發(fā)病率約占0.5％-1％，在80歲以上的老年人中發(fā)病率能達(dá)到1％-3％。PD的主要病理改變是中腦多巴胺能神經(jīng)元中發(fā)生變性蛋白聚集小體(LewyBodies)導(dǎo)致多巴胺能神經(jīng)元凋亡，在臨床上引起靜止性震顫，運(yùn)動(dòng)遲緩，肢體僵硬及步態(tài)不穩(wěn)及其它非運(yùn)動(dòng)癥狀。嚴(yán)重影響患者的生活治療，并且導(dǎo)致沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。

雖然近些年來，隨著對(duì)帕金森病研究的深入，已有一些治療方法能夠減輕疾病的某些癥狀，但是都達(dá)不到徹底治愈的目的，目前的治療實(shí)質(zhì)上主要是提高病人的生活質(zhì)量和工作能力。在帕金森病的各種治療方法中仍以藥物治療為主。但是目前沒有根治帕金森病的藥物，且隨著患病時(shí)間的延長病情逐漸加重。因此，更深入的研究PD的發(fā)病機(jī)制和治療方法很有必要，而穩(wěn)定高效的動(dòng)物模型是深入研究該疾病的前提。

目前較為公認(rèn)的建立PD模型的方法主要有兩種：一種是應(yīng)用6-羥基多巴胺(6-OHDA)注入黑質(zhì)紋狀體系統(tǒng)來損毀大鼠黑質(zhì)紋狀體系統(tǒng)DA能神經(jīng)元所制成的模型；另一種是運(yùn)用MPTP制備猴等靈長類動(dòng)物模型和C57B小鼠PD模型，因?yàn)榇笫笙鄬?duì)靈長類成本低，樣本數(shù)量不受限制；又比小鼠體積大、相對(duì)容易定位，所以很多學(xué)者選擇注射6-OHDA于大鼠腦內(nèi)建立PD動(dòng)物模型。

6-OHDA與多巴胺受體只差一個(gè)羥基，可形成自由基，是一種神經(jīng)毒素，能夠抑制線粒體氧化呼吸鏈復(fù)合物I并激活caspase而啟動(dòng)了細(xì)胞凋亡過程，從而選擇性的損毀DA能神經(jīng)元。DA能神經(jīng)元投射有兩條通路：即黑質(zhì)－紋狀體通路和新邊緣系統(tǒng)通路，前者是黑質(zhì)與紋狀體相連接，后者是中腦腹側(cè)背蓋區(qū)與紋狀體相聯(lián)系。已往很多報(bào)道選擇通路中的黑質(zhì)致密部、內(nèi)側(cè)前腦束、紋狀體、中腦腹側(cè)背蓋區(qū)的一個(gè)或兩個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行PD造模，但由于黑質(zhì)致密部、內(nèi)側(cè)前腦束、紋狀體和中腦腹側(cè)背蓋區(qū)的不同位點(diǎn)的選擇對(duì)PD造模的成功率影響很大，目前已報(bào)道的PD造模成功率多在80％以下，嚴(yán)重制約了對(duì)PD發(fā)病機(jī)制和治療方法的研究。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種雙位點(diǎn)聯(lián)合注射6-OHDA和α-synuclein建立大鼠帕金森病模型的方法，可以得到早期帕金森癥狀的動(dòng)物模型，采用本發(fā)明的制備方法，造模四周的成功率在90％以上，具有造模成功率高，造模時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種雙位點(diǎn)聯(lián)合注射6-OHDA和α-synuclein建立大鼠帕金森病模型的方法，其步驟如下：

將大鼠經(jīng)腹腔注射麻醉劑后，固定于腦立體定位儀上。