[發明專利]一種使用酶切探針報告系統的檢測腺病毒HAdV的引物探針組合物及其試劑盒

在審

• 申請號: 202110515329.1
• 申請日: 2021-05-12
• 公開（公告）號: CN113073151A
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 謝嬋芳;蕭卓;陳翀
• 申請（專利權）人: 廣州普世利華科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及分子生物學領域，具體而言，涉及一種用于檢測腺病毒的引物探針組合產品。所述引物探針組合產品包含F3和B3組成的外引物對和FIP和BIP組成的內引物對，以及環引物和探針。本發明提供的試劑盒用于腺病毒DNA檢測，具有操作簡單、快速、靈敏的特點，為腺病毒的現場快速檢測篩查提供有效的技術手段，具有重要意義。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體而言，涉及一種檢測腺病毒HAdV的引物探針組合物及其試劑盒。

背景技術

人腺病毒（Human adenovirus, HAdV）肺炎（以下簡稱腺病毒肺炎）是兒童社區獲得性肺炎中較為嚴重的類型之一，多發于6個月至5歲兒童，是目前造成嬰幼兒肺炎死亡和致殘的重要原因之一。

HAdV屬于哺乳動物腺病毒屬，為無包膜的雙鏈DNA病毒，1953年由Rowe等首次發現。目前已發現至少90個基因型，分為A-G共7個亞屬，不同型別 HAdV的組織嗜性、致病力、流行地區等特性不同。HAdV感染可引起多種疾病，包括肺炎、支氣管炎、膀胱炎、眼結膜炎、胃腸道疾病及腦炎等。與呼吸道感染相關的HAdV主要有B亞屬（HAdV-3、7、11、14、16、21、50、55 型），C 亞屬（HAdV-1、2、5、6、57型）和E亞屬（HAdV-4型）。

在兒童腺病毒肺炎診療規范中，對腺病毒的病原學檢查包括以下幾種：（1）病毒分離和血清學鑒定。傳統的病毒分離和血清分型方法雖是診斷腺病毒的金標準，但不適于臨床早期診斷。（2）抗原檢測。針對腺病毒衣殼六鄰體抗原進行檢測，多采用免疫熒光方法，標本為鼻咽抽吸物、鼻咽拭子、痰液及肺泡灌洗液，發病 3-5 天內檢出率最高，重癥病例 2-3周仍可陽性。但是該方法存在特異性不高的情況。（3）PCR檢測。比傳統的病毒培養和病毒抗原檢測敏感性更高，標本為鼻咽拭子或痰液、支氣管肺泡灌洗液等。實時定量 PCR 可對病毒進行定量分析，幫助預測病情嚴重程度。但是但是該法需要依賴于較為復雜的檢測流程和相對復雜高價的儀器，同時對于檢測環境的要求很高，目前需要在疾控中心等地集中檢測，容易面臨檢測試劑有限、檢測儀器和實驗人員均超負荷運轉等問題，無法廣泛普及至廣大基層醫院、防控現場和家庭。（4）其他方法。宏基因測序在診斷腺病毒感染以及分型方具有優勢，但價格昂貴，結果需要專業人員判定，不推薦常規開展。該方法主要用于特殊人群如合并基礎疾病、免疫缺陷病、其他方法檢測陰性或病情危重以及混合感染需盡早明確病原的患兒，結果判斷必須結合臨床。

隨著體外核酸恒溫擴增的悄然興起，傳統擴增技術的局限性有所改變，在過去的十年中，使核酸體外擴增變得更加簡單和方便的一些等溫核酸擴增技術已得到快速發展，如LAMP（環介導核酸擴增技術）、HDA（解旋酶依賴等溫核酸擴增技術）、RPA（重組酶依賴的擴增技術）等均可在等溫條件下擴增病毒核酸。這些技術只需要溫度控制裝置來保持一個恒定反應溫度，就可以實現高效的核酸擴增，從而得以擺脫對精密控制溫度變化的PCR儀的依賴。若能在無需反復變溫的反應條件下實現核酸的擴增，將進一步使核酸擴增技術簡單化，并有利于此類技術更廣范圍的應用。及時準確地病毒檢測對于疾病的防治具有重要意義，因此研究和開發一種能在基層診療機構使用，在常溫下快速檢測核酸的試劑盒非常有必要。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一方面涉及引物探針組合物，其包含F3和B3組成的外引物對和FIP和BIP組成的內引物對，以及環引物和探針；

F3、B3、FIP、BIP的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1~4所示；

HAdV-F3（SEQ ID NO .1）：5’-TTGCGATCGCACCCTTTG-3′

HAdV-B3（SEQ ID NO .2）：5’-ACACGGACCACGTCAAAG-3′