[發明專利]脂肪間充質干細胞在制備治療貓脂肪肝藥物中的用途

在審

• 申請號: 202110507727.9
• 申請日: 2021-05-10
• 公開（公告）號: CN115317519A
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: 張利生;侯晨姣
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61K9/19;A61P1/16
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 徐紹新

本發明公開了脂肪間充質干細胞在制備治療貓脂肪肝藥物中的用途，屬于制藥領域。申請人通過制作FHL動物模型并靜脈移植了ADSCs及其培養液凍干粉劑，結果發現，移植組能顯著模型組動物的死亡率，病理組織學染色還表明，ADSCs及MSCM移植能顯著減少肝臟病變，降低肝細胞中的脂質含量，對貓脂肪肝的治療具有積極作用。因此，ADSCs對于貓脂肪肝具有很好的治療效果，具有開發相關藥物的潛力。

技術領域

本發明涉及脂肪間充質干細胞的制藥新用途，尤其是制備治療貓脂肪肝藥物的新用途，屬于制藥領域。

背景技術

1.ADSCs簡介及生物學特性

干細胞是未成熟的組織前體細胞，具有自我更新、形成克隆細胞群以及多潛能分化等的能力，干細胞療法用于機體急慢性損傷后，再生修復受損的組織器官并重建其功能。根據細胞來源、發育階段以及分化潛能，干細胞可分為胚胎干細胞、誘導多能干細胞以及成體干細胞三種類型。胚胎干細胞雖然具有發育的全能性及擴增的無限性，但其“非定位性”分化難以控制，容易導致畸胎瘤，同時細胞獲取來源也存在倫理爭議，阻礙了在臨床疾病治療上的應用。誘導多能干細胞技術尚在起步階段，誘導效率低下，難以獲得狀態、質量穩定的干細胞制品。相較而言，成體干細胞包括造血干細胞(HSCs)、間充質干細胞(MSCs)、神經干細胞等(NSCs)，在體內廣泛存在，取材方便，不涉及倫理問題且致瘤性低，是最具有臨床應用前景的細胞類型。

HSCs是血液系統中的成體干細胞，它是目前研究歷史最長且最為深入的一類成體干細胞，但異基因移植時免疫排斥需配型，且應用局限于治療惡性血液病和腫瘤。NSCs存在于神經系統中，能夠分化為神經元、星型膠質細胞及少突膠質細胞，對于開發治療神經退行性疾病及脊髓損傷的療法至關重要。與人類醫學相比，HSCs和NSCs在獸醫學中起的作用較小，主要是由于缺乏對應的移植和恢復條件，同時代價較為昂貴。相比之下，MSCs異體移植免疫原性較低，且近年來多種來源的MSCs分離培養及大規模制備技術逐漸成熟，利用MSCs來治療各種急慢性損傷有望成為獸醫再生醫學的臨床常規方法，是獸醫臨床轉化醫學理想的“種子細胞”。

迄今為止，已經成功地從各種組織，包括骨髓、脂肪、胎盤、臍帶、牙髓等分離出了MSCs，目前最常用的MSCs來源是骨髓和脂肪組織，相較于其他組織，它們能提供更多的MSCs。脂肪間充質干細胞(ADSCs)與骨髓間充質干細胞(BMSCs)所表達的表面蛋白標志物基本相似，一樣具有高度增殖和多向分化的能力，但ADSCs的增殖速率顯著大于BMSCs，而且動物體脂肪儲備豐富，取材微創，術后恢復迅速，并發癥少，因此，對于臨床應用而言，脂肪組織是首選的MSCs來源。

ADSCs的特性根據分離脂肪的位置不同而有所差異，而從腹股溝皮下分離的ADSCs可塑性最高。一般利用外科手術切取或吸脂術獲取動物腹股溝皮下脂肪，運用酶消化法或組織貼塊法接種培養細胞，通過不斷換液除去未貼壁細胞而獲得較純的ADSCs。體外培養ADSCs形態上與成纖維細胞相似，主要表現為長梭形、紡錘形，常呈“旋渦狀”排列，傳代后，細胞逐漸純化，3-4d可傳代一次。ADSCs事實上并不是完全同質的細胞群體，是包含前脂肪細胞、血管內皮細胞、平滑肌細胞、成纖維細胞等的不均勻混合物。目前尚未發現特異性的ADSCs表面抗原，它既有間質細胞的表面抗原，又有內皮細胞、上皮細胞、肌肉細胞的表面抗原，而且ADSCs的體外表型呈動態改變，隨著傳代次數的增加，部分標志物的表達增多或減少甚至喪失，例如CD34是ADSCs短期培養和原代培養鑒定的潛在標志物，但長期培養的ADSCs不表達CD34。因此，目前通常聯合多種表面標志物對ADSCs進行鑒定，根據國際細胞治療協會間充質和組織干細胞委員會(ISCT)的提出的標準，體外標準培養條件下MSCs具有塑料粘附性，MSCs不表達造血干細胞的表面抗原，如CD34、CD45、CD14等，95％陽性表達CD73、CD105和CD90等，在體外標準條件下能誘導分化為成骨細胞、脂肪細胞和軟骨細胞，聯合檢測可作為分選和鑒定ADSCs的依據。

2.ADSCs的治療潛力及醫學進展