[發明專利]核酸分子、PCR引物對及用于檢測禽毛滴蟲TBP基因的試劑盒

在審

• 申請號: 202110505497.2
• 申請日: 2021-05-10
• 公開（公告）號: CN113151308A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 孫銘飛
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院動物衛生研究所
• 主分類號: C12N15/30
• 分類號: C12N15/30;C12Q1/6893;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 戴志攀

本發明公開了一種核酸分子、PCR引物對及用于檢測禽毛滴蟲TBP基因的試劑盒。發明人通過廣泛研究，在禽毛滴蟲中克隆得到如SEQ ID NO:1所示的禽毛滴蟲TBP全長基因編碼序列，并利用該TBP全長基因編碼序列進一步設計得到能夠檢測禽毛滴蟲TBP基因及其轉錄水平的PCR引物對和相應的PCR反應條件，進而組裝成用于檢測禽毛滴蟲TBP基因的試劑盒，從而可以滿足寄生生物學、生命科學研究者的檢測需要，以及促進對該病原的基因水平檢測及其轉錄調控信號的研究進展，為基因功能研究和藥物開發等研究工作提供有利技術支撐。上述PCR引物對重復性高，特異性強，靈敏度高，對非目的基因沒有擴增信號。

技術領域

本發明涉及分子生物學檢測領域，尤其是涉及一種核酸分子、PCR引物對及用于檢測禽毛滴蟲TBP基因的試劑盒。

背景技術

我國養鴿歷史悠久，將鴿子作為商品生產也有100多年歷史，現階段肉鴿養殖業已經遍布我國各個地區，并且規模不斷壯大，鴿感染性疾病的有效防控也越發重要。其中，鴿毛滴蟲病(又稱“鴿癀”)也是養鴿場高發的消耗性寄生蟲病，對肉鴿生產性能和幼鴿存活率均具有重要危害性。最常見的特征變化是口腔和咽喉黏膜形成粗糙鈕扣狀的黃色沉著物；濕潤者，稱為濕性潰瘍；呈干酪樣或痂塊狀則稱為干性潰瘍。臍部感染時，皮下形成腫塊，呈干酪樣或潰瘍性病變；波及內臟器官時，便引起黃色粗糙界線明顯的干酪樣病灶，結果導致實質器官組織壞死。病鴿因口腔潰瘍而妨害采食，在幼鴿和生長期鴿中可引起很高的死亡率。鴿毛滴蟲病的病原是禽毛滴蟲，屬鞭毛亞門，動鞭毛綱，多鞭毛目，毛滴蟲科，毛滴蟲屬。實驗室診斷一般通過顯微鏡檢查口腔、食道、嗉囊分泌物涂片發現蟲體，或刮取病變處黏液制成涂片，染色鏡檢見到典型蟲體。禽毛滴蟲蟲體呈瓜子形或梨形，蟲體前端有毛基體伸出4根鞭毛，使蟲體可迅速移動。在蟲體的一側有波動膜，其起始于蟲體的前端，終止于蟲體稍后方蟲體前部有1橢圓形的核，蟲體前部與波動膜相對，一側有胞口，蟲體中央有一根細長的軸柱自前向后伸延至蟲體后緣之外。蟲體憑借在體液中作螺旋式運動，以分裂方式增殖，約4小時便可增殖一世代。目前對于該病原的致病機制研究仍很少，究其原因，在于缺乏有效的基因水平檢測手段。

聚合酶鏈式反應(PCR)是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點是能將微量的DNA大幅增加。其中，熒光定量PCR是一種常見的核酸定量技術，也是低成本，重復性高，便于操作的基因水平檢測手段。該技術在PCR反應系統中引入了SYBR、TB Green等核酸熒光標記物質，通過檢測每個熱循環后PCR反應體系中的熒光值的增加情況，進而實時監測PCR的擴增情況，并擬合出每個樣本的熒光定量變化曲線，從而獲得每個反應管的Ct值(熒光變化達到閾值時的循環數)，以起始模板數的對數為橫坐標，以Ct值為縱坐標制備標準曲線，據此標準曲線和各個標本的Ct值對每個反應的起始DNA模板數進行定量測定。

TBP蛋白，全稱TATA binding protein，是廣泛存在于真核細胞的重要轉錄因子。該蛋白可以高親和力結合RNA pol I、RNA pol II和RNA pol III等遺傳信息的翻譯轉錄調控關聯蛋白的TATA盒區域，從而確保細胞正常增殖生長。因此，TBP基因及其轉錄水平檢測，可以有助于研究生物體的遺傳代謝情況，也是潛在的藥物靶標之一。

但是，禽毛滴蟲作為肉鴿重要致病性寄生蟲，對于其轉錄調控信號的研究報道極為匱乏，TBP基因也沒有在NCBI、Uniprot等核酸序列數據庫公開，這阻礙了對該病原的基因水平檢測及其轉錄調控信號的研究進展。

發明內容

基于此，有必要提供一種展示禽毛滴蟲的TBP全長基因編碼序列的核酸分子。

一種核酸分子，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本發明還提供了一種PCR引物對，所述PCR引物對能夠通過PCR擴增反應檢測如上所述的核酸分子。