[發明專利]一種miRNA的檢測方法以及用于檢測miRNA的側流層析試紙條

有效

• 申請號: 202110504905.2
• 申請日: 2021-05-10
• 公開（公告）號: CN113215274B
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 陳愛亮;王楠;張娟;謝瑞彬;于文杰;孫小云
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/113;G01N33/558;G01N33/532;G01N33/533
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王煥

1.一種肉類miRNA的檢測方法，其特征在于，包括：針對待檢測的miRNA，設計合成互補DNA單鏈；基于所述miRNA與DNA單鏈形成DNA-miRNA雜交復合物，采用免疫層析的方式進行檢測；

所述miRNA為肉類種屬特異性且穩定表達的miRNA；所述miRNA為羊肉和/或鴨肉的miRNA；當所述miRNA為羊肉的miRNA時，其序列為SEQ ID No. 1所示；當所述miRNA為鴨肉的miRNA時，其序列為SEQ ID No. 2所示。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述免疫層析包括膠體金免疫層析和熒光免疫層析中的任一種。

3.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述熒光免疫層析包括熒光素免疫層析和量子點免疫層析。

4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測采用側流層析試紙進行。

5.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，將設計合成的帶有熒光素或膠體金標記的生物素化DNA單鏈直接固定在試紙的結合墊上，所述試紙的檢測線T線上包被有識別RNA-DNA雜交復合物的抗體，質控線C線上包被有鏈霉親和素。

6.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，將膠體金或熒光標記的S9.6抗體直接固定在試紙的結合墊上，所述試紙的檢測線T線上包被有識別RNA-DNA雜交復合物的抗體，質控線C線上包被有抗鼠IgG。

7.根據權利要求5所述的檢測方法，其特征在于，所述識別RNA-DNA雜交復合物的抗體為小鼠單克隆抗體S9.6；

所述熒光素包括異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明、四甲基異硫氰酸羅丹明、熒光素Cy5中的任一種。

8.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，使設計的DNA單鏈探針與所述miRNA形成雜交復合物后，采用側流層析試紙條進行檢測。

9.根據權利要求8所述的檢測方法，其特征在于，采用側流層析試紙條進行檢測時，當試紙條出現兩條條帶，一條位于質控區內，一條位于檢測區，則結果為陽性，表明樣本中含有待檢測的miRNA；當試紙條只有質控區出現一條條帶，檢測區沒有條帶，則結果是陰性，表明樣本中不含有待檢測的miRNA。

10.一種用于檢測miRNA的側流層析試紙條，其特征在于，所述試紙條包括樣品墊、結合墊、NC膜、底板、檢測線T線、質控線C線和吸水墊；所述試紙條的結合墊上固定有針對待檢測miRNA設計合成的膠體金或熒光標記的生物素化DNA單鏈探針或膠體金或熒光標記的小鼠單克隆抗體S9.6；

所述miRNA為肉類種屬特異性且穩定表達的miRNA；所述miRNA為羊肉和/或鴨肉的miRNA；當所述miRNA為羊肉的miRNA時，其序列為SEQ ID No. 1所示；當所述miRNA為鴨肉的miRNA時，其序列為SEQ ID No. 2所示。