[發明專利]一種貝萊斯芽孢桿菌及用途

在審

• 申請號: 202110504055.6
• 申請日: 2021-05-10
• 公開（公告）號: CN112980751A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發明（設計）人: 李祝;李玉環;肖洋;周義;聶玉英;鄧麗;胡祥
• 申請（專利權）人: 畢節市家鄉美農業綜合開發有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/689;C12Q1/04;A01N63/22;A01P1/00;A01P3/00;A01P21/00;C12R1/07
• 代理公司: 北京化育知識產權代理有限公司 11833
• 代理人: 秦麗

本發明公開了一種貝萊斯芽孢桿菌及用途，配方包括：貝萊斯芽孢桿菌；組分的質量百分比是：100％的貝萊斯芽孢桿菌；包括具有產纖維素酶、淀粉酶、蛋白酶、β?葡聚糖酶和過氧化氫能力的貝萊斯芽孢桿菌，對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、齊整小核菌、鏈格孢菌、青枯雷爾氏菌、根癌農桿菌、胡蘿卜軟腐歐文式桿菌、橘青霉菌、霜霉菌等食源性病原菌和植物病原菌具有良好的拮抗作用，有效抑制了病原菌的滋生，在植物促生、病害防控、環境保護、食品生產等方面具有廣泛用途；該發明通過兩道拮抗篩選，從而提高了制備過程中的篩選力度，增強了培育產品的拮抗活性，有效抑制了病原菌的滋生，提升了貝萊斯芽孢桿菌的質量。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體為一種貝萊斯芽孢桿菌及用途。

背景技術

酸菜作為我國傳統的蔬菜發酵制品，具有清脆爽口，開胃促消化等優點，深受廣大民眾喜愛。酸菜中微生物種群繁多，其中主要包括乳酸球菌屬、乳酸鏈球菌屬、乳桿菌屬、雙歧桿菌屬和芽孢桿菌屬等，其中，貝萊斯芽孢桿菌廣泛存在于自然界中，人畜無害并對很多病原微生物有良好的拮抗作用，具有抗菌譜廣、生長迅速、易分離培養、抗逆性強和生物安全性高等優點，主要應用于農業、食品、工業、醫學、冶金、林業、環保以及軍事等領域。

然而，現有的貝萊斯芽孢桿菌制備方法大多篩選力度不足，培育的貝萊斯芽孢桿菌拮抗活性較低，無法有效抑制病原菌的滋生，影響了貝萊斯芽孢桿菌的質量，且生理生化鑒定和分子鑒定不全面，制備精度低，影響了貝萊斯芽孢桿菌的純度，降低了貝萊斯芽孢桿菌的抑菌率。

發明內容

本發明的目的在于提供一種貝萊斯芽孢桿菌及用途，以解決上述背景技術中提出篩選力度不足、鑒定不全面以及制備純度低的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種貝萊斯芽孢桿菌，配方包括：貝萊斯芽孢桿菌；組分的質量百分比是：100％的貝萊斯芽孢桿菌。

一種貝萊斯芽孢桿菌的制備方法，包括以下步驟：步驟一，取液稀釋；步驟二，涂布培養；步驟三，形態鑒定；步驟四，分離純化；步驟五，拮抗初篩；步驟六，拮抗復篩；步驟七，生理鑒定；步驟八，分子鑒定；步驟九，擴增培育；

其中上述步驟一中，取適量的酸菜汁，用倍比稀釋法分別稀釋至10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5和10^-6，等量稱取后得到多個稀釋液；

其中上述步驟二中，用無菌玻璃涂布棒對步驟一中得到的多個稀釋液分別進行等量蘸取，并均勻涂布到固體培養平板上，恒溫培養，得到多個單菌落；

其中上述步驟三中，用接種環從步驟二中得到的單菌落里挑取適量的細菌，分別在固體培養平板上劃線，恒溫培養，觀察菌落形狀，并經革蘭氏染色后在顯微鏡下觀察，對菌落進行形態鑒定；

其中上述步驟四中，根據步驟三的鑒定結果，從步驟二中得到的多個單菌落里挑取出不同形態的，分別用劃線平板法接種到固體培養平板上，純化兩次，得到純化菌株；

其中上述步驟五中，以病原細菌為指示菌，接種到液體培養搖瓶中，恒溫振蕩培養，并使OD600為0.6～0.8，得到指示菌液，再按照1∶100的體積比量取對應量的指示菌液，倒在煮融后冷卻至50℃的固體培養平板上混勻，用牛津杯點接上步驟四中得到的純化菌株，凝固后恒溫培養，測其抑菌圈直徑，并以不點接純化菌株為空白對照，篩選出對指示菌抑菌效果好的初篩拮抗菌；