[發明專利]一種工程化外泌體納米馬達及其制備方法

有效

• 申請號: 202110503881.9
• 申請日: 2021-05-08
• 公開（公告）號: CN113403270B
• 公開（公告）日: 2023-09-22
• 發明（設計）人: 萬密密;沈健;毛春;王琪;趙梓楠;談開元
• 申請（專利權）人: 南京師范大學
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/0786;C12N5/09;C08F220/60;C08F222/38;A61K47/46;A61K47/18;A61K47/04;A61K47/32;A61K47/58;A61K47/54;A61K47/52;A61K47/51;A61K3
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 孫斌

1.一種工程化外泌體納米馬達，其特征在于，所述工程化外泌體納米馬達由表面巰基化的一氧化氮驅動基體通過水溶性交聯劑對外泌體進行表面修飾形成；所述一氧化氮驅動基體為共價鍵合L-精氨酸的兩性離子聚合物或負載L-精氨酸的碗狀介孔硅納米材料；所述水溶性交聯劑為4-(N-馬來酰亞胺甲基)環己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亞胺酯鈉鹽。

2.根據權利要求1所述的工程化外泌體納米馬達，其特征在于，所述外泌體的來源包括干細胞或者巨噬細胞。

3.一種權利要求1所述的工程化外泌體納米馬達的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）將一氧化氮驅動基體進行巰丙化表面改性，獲得富含巰基的NO驅動基體；

（2）將步驟（1）中得到的富含巰基的一氧化氮驅動基體與水溶性交聯劑反應，離心洗滌后得到表面富含羥基琥珀酰亞胺基團的一氧化氮驅動基體；

（3）將步驟（2）中得到的表面富含羥基琥珀酰亞胺基團的一氧化氮驅動基體與外泌體在低溫條件下混合，分離純化得到工程化外泌體納米馬達；

所述一氧化氮驅動基體為表面富含羥基琥珀酰亞胺基團的共價鍵合L-精氨酸的兩性離子聚合物或表面富含羥基琥珀酰亞胺基團的負載L-精氨酸的碗狀介孔硅納米材料；所述水溶性交聯劑為4-(N-馬來酰亞胺甲基)環己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亞胺酯鈉鹽。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）所述一氧化氮驅動基體為共價鍵合L-精氨酸的兩性離子聚合物，其制備過程為：將甲基丙烯酸酐與L-精氨酸在去離子水、1,4-二氧六環與三乙胺的混合溶劑中反應分離純化后得到精氨酸單體；將得到的精氨酸單體溶解于去離子水中，加入引發劑與雙鍵交聯劑，超聲分散反應后分離純化，得到共價鍵合L-精氨酸的兩性離子聚合物。

5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）所述一氧化氮驅動基體為負載L-精氨酸的碗狀介孔硅納米材料，其制備過程為：以?CTAB?為模板劑，濃氨水為催化劑，乙醇為助溶劑的混合體系中，加入雙(γ-三乙氧基硅基丙基)四硫化物和正硅酸乙酯，并在氫氧化鈉作用下形成碗狀介孔硅納米材料；將得到的碗狀介孔硅納米材料在高濃度的精氨酸溶液中形成負載L-精氨酸的碗狀介孔硅納米材料。

6.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，當一氧化氮驅動基體為共價鍵合L-精氨酸的兩性離子聚合物時，步驟（1）中進行巰丙化表面改性一氧化氮驅動基體的濃度為10⁵-10¹²個/mL，3-巰丙基三乙氧基硅烷用量為0.1-10?mL，反應溫度為10-50℃，反應時間為10-48?h；當一氧化氮驅動基體為負載L-精氨酸的碗狀介孔硅納米材料時，步驟（1）中進行巰丙化表面改性碗狀介孔硅納米材料的質量為1-50?mg，3-巰丙基三乙氧基硅烷用量為0.01-1?mL，氨丙基三乙氧基硅烷用量為0.01-1?mL，反應溫度為10-50℃，反應時間為10-48h；步驟（2）中富含巰基的NO驅動基體的濃度為10⁵-10¹²個/mL，水溶性交聯劑濃度為0.1-10mg/mL，反應溫度為10-50℃，反應時間為10-48?h；步驟（3）中表面富含羥基琥珀酰亞胺基團的一氧化氮驅動基體與外泌體個數比為10/1-1/10，反應溫度為0-10℃，反應時間為1-24h。

7.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述精氨酸單體與交聯劑的摩爾比為1-20，引發劑與交聯劑的摩爾比為0.1-1，反應時間約為0.5-5?h，反應溫度為50-350℃。

8.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述雙(γ-三乙氧基硅基丙基)四硫化物與正硅酸乙酯的體積比為1：1-1：10，反應時間為12?h-36?h，反應溫度為25-50℃；所述氫氧化鈉的濃度為0.1-1?M，作用時間為10-60?min，反應溫度為25-50℃；所述高濃度的精氨酸溶液濃度為0.1-10?mg?mL^-1。