[發明專利]一種頭孢噻呋油混懸注射液的無菌檢測方法

有效

• 申請號: 202110503837.8
• 申請日: 2021-05-10
• 公開（公告）號: CN112924633B
• 公開（公告）日: 2021-08-10
• 發明（設計）人: 聶麗娜;劉愛玲;曹春芳;李亞玲;李守軍;李雪嬌;吳燕子
• 申請（專利權）人: 天津瑞普生物技術股份有限公司;瑞普（天津）生物藥業有限公司
• 主分類號: G01N33/15
• 分類號: G01N33/15
• 代理公司: 天津市尚文知識產權代理有限公司 12222
• 代理人: 郭平平

本發明公開了一種頭孢噻呋油混懸注射液的無菌檢測方法，先進行預處理：將頭孢噻呋搖勻后加入青霉素酶，混合均勻，制得混合液；將混合液分別加入到含吐溫?80的硫乙醇酸鹽流體培養基和含吐溫?80的改良馬丁培養基中，再次搖勻后進行恒溫處理，得供試品溶液。恒溫處理后將供試品溶液直接接種進行無菌檢測。該無菌檢測方法對含量為5%和10%的頭孢噻呋油混懸注射液效果最佳。該方法能有效提高檢測數據的準確性和重現性，可操作性強，且專屬性好，油性輔料對無菌檢查無干擾。

技術領域

本發明屬于藥物分析技術領域，具體涉及一種獸用藥物制劑的無菌檢測方法，尤其涉及頭孢噻呋油混懸注射液的無菌檢測方法。

背景技術

頭孢噻呋（Ceftiofur）別名賽得福，是美國于20 世紀80 年代開發成功的獸醫專用的第三代頭孢菌素，該藥1988 年在美國首次上市，由于其優良的抗菌活性和藥動學特征，已陸續被美國、加拿大、日本及歐洲一些國家正式批準用于肉牛、奶牛、馬、豬、羊的呼吸道疾病的治療。其化學名稱為(6R,7R)-7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)(甲氧基亞胺基)乙酰胺基]-3-[(2-呋喃基羰基)硫甲基]-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜雙環[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸，分子式C19H17N5O7S3，分子量523.56，化學結構式見如下圖。頭孢噻呋具有氨基和羧基，故為兩性化合物，其在強酸、強堿及高溫條件下易分解，但其鈉鹽及鹽酸鹽較穩定。

頭孢噻呋是動物專用的第三代頭孢菌素類抗生素，其抗菌譜廣，抗菌活性強，對革蘭陽性菌、革蘭陰性菌及厭氧菌均有強大的抗菌活性，其中對革蘭陽性菌與第一代頭孢菌素比較相近或較弱，對革蘭陰性菌如大腸桿菌、傷寒沙門桿菌、多殺性和溶血性巴氏桿菌、鏈球菌等具有強大的抗菌活性。適用于各種敏感菌引起的呼吸道、泌尿道等感染，尤其適用于防治大腸桿菌、沙門桿菌、綠膿桿菌、葡萄球菌等引起的雞苗早期死亡，初生仔豬的剪臍帶、打耳號、剪齒、剪尾等引起的傷口感染，以及嗜血性放線桿菌引起的豬傳染性胸膜肺炎、豬鏈球菌病、豬肺疫及仔豬黃白痢等。

將頭孢噻呋與注射用油配制成混懸型注射液，具有良好的抗菌作用，被廣泛用于臨床應用，目前國家批準的頭孢噻呋油混懸制劑主要有鹽酸頭孢噻呋油混懸注射液、頭孢噻呋油混懸注射液和頭孢噻呋晶體注射液三種。作為注射用藥，按照《中華人民共和國獸藥典》2015版相關要求，需要檢測無菌。無菌檢查法包括濾膜過濾法和直接接種法，頭孢噻呋油混懸注射液屬于β-內酰胺類的混懸液，若采用濾膜法，頭孢噻呋無法通過濾膜，所以頭孢噻呋油混懸注射液的無菌檢查方法采用直接接種法，利用青霉素酶解頭孢噻呋，使其失活，然后采取直接接種法進行無菌檢查。目前有文件（CN201310665166.0）記載了頭孢噻呋類油混懸型注射液無菌檢測方法采用0.1%吐溫-80%的蛋白胨溶液進行前處理，這種處理方式在藥物無菌檢測培養14天時，觀察現象不明顯，無法準確判斷陰性或陽性結果，需要再進行一步接菌處理，即取培養液接種于斜面培養基上，細菌培養2日，真菌培養3日，依法檢查。不僅耗費人力，增加污染的風險，也延長了檢測周期。針對頭孢噻呋油混懸注射液，需要建立一種準確度高、操作便捷的無菌檢測方法。

發明內容

基于以上存在的問題，本發明旨在提供一種頭孢噻呋油混懸注射液的無菌的檢測方法。該檢測方法為直接接種法，操作便捷，靈敏度高，試驗結果容易觀察判斷、實用性強。

本發明提供的一種頭孢噻呋油混懸注射液無菌檢測方法是先進行預處理：將頭孢噻呋搖勻后加入青霉素酶，混合均勻，制得混合液；將混合液分別加入到含吐溫-80的硫乙醇酸鹽流體培養基和含吐溫-80的改良馬丁培養基中，再次搖勻后進行恒溫處理，得供試品溶液。將前置處理得到的供試品溶液恒溫處理后直接接種于適合相應菌生長的培養基中，培養后依法檢測，具體檢測方法依據中國獸藥典相關規定進行。該無菌檢測方法對含量為5%和10%的頭孢噻呋油混懸注射液效果最佳。

本發明提供的一種頭孢噻呋油混懸注射液無菌檢測方法的預處理步驟包括：