[發明專利]一種抗核抗體化學發光定量檢測的試劑盒及其檢測方法和應用

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• 申請號: 202110503429.2
• 申請日: 2021-05-10
• 公開（公告）號: CN113281498A
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 海茵生物科技（北京）有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 北京領科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11690
• 代理人: 徐丹丹;張丹

本發明提供了一種抗核抗體化學發光定量檢測的試劑盒及其檢測方法和應用，所述的試劑盒將化學發光分析技術與酶聯免疫技術相結合，靈敏度高、線性范圍寬、反應迅速、操作簡單，可實現抗SSA、Ro52、SSB/La、Sm、dsDNA、核小體、組蛋白、P0、PCNA、Scl?70、Jo?1、PM/SCl、CENP?B、nRNP/Sm和AMA?M2的自身抗體共15個項目聯檢，在輔助診斷自身免疫性疾病中具有重要價值。

技術領域

本發明屬于體外檢測領域，尤其涉及一種抗核抗體化學發光定量檢測的試劑盒及其檢測方法和其在生物醫藥領域中的應用。

背景技術

抗核抗體(antinuclear antibody，ANA)，又稱抗核酸抗原抗體，是一組對細胞核內的DNA、RNA、蛋白或這些物質的分子復合物產生的自身抗體。按其核內各個分子的性能不同可將各ANA區分開來，如：①抗DNA抗體；②抗組蛋白抗體；③抗非組蛋白抗體；④抗核仁抗體等。每一大類又因不同抗原特性而再分為許多種類。因此ANA在廣義上是一組各有不同臨床意義的自身抗體，更確切的名稱應為抗核抗體譜。目前臨床上抗核抗體譜的檢測主要包括抗SSA抗體、抗Ro52抗體、抗SSB/La抗體、抗Sm抗體、抗dsDNA抗體、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體、抗P0抗體、抗PCNA抗體、抗Scl-70抗體、抗Jo-1抗體、抗PM/SCl抗體、抗CENP-B抗體、抗nRNP/Sm抗體、抗AMA-M2抗體。ANA主要存在于IgG，也見于IgM、IgA，甚至IgD及IgE中。抗核抗體能識別各種細胞核組分，可特征性地出現于許多自身免疫性疾病中，尤其是類風濕性疾病，可判斷疾病的活動性及預后，觀察治療反應，指導臨床治療。

目前臨床上抗核抗體的檢測有免疫印跡法、酶免法和磁微粒化學發光。免疫印跡法應用的是膜條顯色技術，其特點為固定幾個項目在同一膜條測定，一般通過手工或者半自動膜條儀進行實驗操作，最終通過肉眼進行定性判定，該技術靈敏度低，反應時間長。酶聯免疫吸附法的靈敏度在膜條免疫法基礎上有所提升，但仍然較低，并且線性范圍窄，重復性差，反應時間也較長，且需要單個項目測定，無法聯檢，仍然不能很好滿足臨床的應用。磁微粒化學發光法的配合全自動化學發光儀，能定量檢測抗核抗體的每一個項目，時間較長，目前市場上的廠家主要是儀器的速度受限，且儀器較大，維護保養需專業工程師定期上門服務。

專利CN106248943A公開了一種抗核抗體化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法，利用磁微粒化學發光法進行檢測，此發明檢測的是抗核抗體一個項目，而無法檢測抗核抗體相關的十幾種檢測指標。

專利CN101329341A公開了一種檢測自身免疫疾病相關抗核抗體譜的試劑盒及其制備方法，使用酶聯免疫吸附法與膜條免疫法結合來進行檢測，但結果仍為定性的結果，靈敏度低，線性范圍窄，重復性差，反應時間長。

發明內容

本發明的第一方面，提供了一種抗核抗體(ANA)化學發光定量檢測的試劑盒，所述的試劑盒包括包被有抗原的抗核抗體的試劑盤或試劑條、催化底物發光的酶標記抗體、底物。

優選的，所述的抗原包括SSA、Ro52、SSB/La、Sm、dsDNA、核小體、組蛋白、P0、PCNA、Scl-70、Jo-1、PM/SCl、CENP-B、nRNP/Sm和/或AMA-M2中的任一種或兩種以上。

優選的，所述的試劑盤或試劑條選自酶標板、微孔板、膠體金、微粒、微球、親和膜、液相芯片、玻片、試紙片或塑料球。

優選的，所述的酶選自辣根過氧化酶、葡萄糖氧化酶、丙酮酸激酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、螢火蟲素酶、半乳苷酶或堿性磷酸酶(ALP)，進一步優選的，所述的酶為堿性磷酸酶，所述的催化底物發光的酶標記抗體為含有堿性磷酸酶標記的羊抗人多克隆抗體。

優選的，所述的底物選自魯米諾、異魯米諾及其衍生物、吖啶酯及吖啶酰胺類、金鋼烷-1,2-二氧乙烷及其衍生物，進一步優選的，所屬的底物選自金鋼烷-1,2-二氧乙烷及其衍生物。