[發明專利]一種MSC的培養基添加劑及其應用

有效

• 申請號: 202110501627.5
• 申請日: 2021-05-08
• 公開（公告）號: CN113151164B
• 公開（公告）日: 2023-08-18
• 發明（設計）人: 趙萌;蔣琳加;婁琪
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/0783;A61K35/28;A61P37/06;A61P1/16
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 劉曉娟

本申請屬于生物技術的領域，尤其涉及一種MSC的培養基添加劑及其應用。本申請第一方面提供一種MSC的培養基添加劑，包括全反式維甲酸和γ?干擾素。本申請第二方面公開所述培養基添加劑在提高MSC的免疫調控功能中的應用。本申請第三方面公開所述培養基添加劑在提高所述MSC的RIG?I的表達中的應用。本申請第四方面提供了一種MSC，包括：將從體內取出組織或器官分離處理得到的MSC進行原代培養；待所述MSC貼壁后，在所述MSC的培養基中添加所述培養基添加劑繼續培養，制得MSC；其中，所述的培養基添加劑包括全反式維甲酸和γ干擾素。本申請能有效解決現有技術在擴增MSC過程中存在的其免疫調控功能下降的技術問題。

技術領域

本申請屬于生物技術的領域，尤其涉及一種MSC的培養基添加劑及其應用。

背景技術

間充質干細胞(Mesenchymal?stem?cell,MSC)因具有多向分化潛能，免疫調控以及促進組織修復再生等功能，為現代醫學提供了一種嶄新的生物療法。目前，與MSC相關的臨床試驗已經超過900項，占半數以上都是依據MSC的免疫調控的特性來治療移植物抗宿主疾病(Graft-versus-host?disease,GVHD)、膝骨關節炎、克羅恩病等自身免疫性疾病。

為了治療臨床試驗中患者的疾病，往往需要使用大量的MSC。那就需要大規模體外培養擴增MSC。目前MSC的體外培養體系主要由培養基和培養條件組成。培養基為基礎培養基加入5～10％胎牛血清(FBS)或人AB血清(HABS)。培養條件為根據MSC具有黏附的特性將MSC置于具有黏附性的培養皿中，并在37℃，5％氧氣的低氧環境下進行培養。待光鏡下看細胞聚合度達80％左右的密度可進行傳代。大規模體外培養擴增功能強的MSC是目前臨床試驗中亟待解決的問題。

然而，在現有的體外培養條件下，MSC會隨著體外培養時間的延長而功能下降，尤其是免疫調控的功能。體外擴增的MSC功能低下，成為了目前很多與MSC相關的臨床試驗結果和預期相距甚遠的原因之一。

發明內容

有鑒于此，本申請提供了一種MSC及其制備方法和應用，能有效解決現有技術在擴增MSC過程中存在的其免疫調控功能下降的技術問題。

本申請第一方面提供了一種MSC的培養基添加劑，包括全反式維甲酸和γ-干擾素。

其中，本申請發現全反式維甲酸(All-trans?retinoic?acid,ATRA)和γ-干擾素(γinterferon,IFN-γ)具有能夠穩定并且提高MSC免疫調節的治療功能，為能制備具有更好免疫調控功能的間充質干細胞的一種新產品。

作為優選，所述全反式維甲酸和所述γ-干擾素的質量比為(0.3～30)：1。

本申請第二方面公開了所述培養基添加劑在提高MSC的免疫調控功能中的應用。

作為優選，所述提高MSC的免疫調控功能具體為提高所述MSC的CXCL9免疫調控分子、CCL2免疫調控分子、Nos2免疫調控分子和PD-L1免疫調控分子的表達。

本申請第三方面公開了所述培養基添加劑在提高所述MSC的RIG-I的表達中的應用。

具體的，本申請所述培養基添加劑通過作用所述MSC的RIG-I以提高所述MSC免疫調控治療功能。

本申請第四方面提供了一種MSC，經以下步驟培養得到；

將從體內取出組織或器官分離處理得到的MSC進行原代培養；

待所述MSC貼壁后，在所述MSC的培養基中添加所述培養基添加劑繼續培養，制得MSC；

其中，所述的培養基添加劑包括全反式維甲酸和γ干擾素。

作為優選，所述全反式維甲酸和所述γ-干擾素的質量比為(0.3～30)：1。