[發明專利]一種小粒徑瓊脂糖羧基磁珠及其制備方法

在審

• 申請號: 202110499681.0
• 申請日: 2021-05-08
• 公開（公告）號: CN113181883A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 張佳斌;張振宇;尚春慶;安新
• 申請（專利權）人: 蘇州英芮誠生化科技有限公司
• 主分類號: B01J20/24
• 分類號: B01J20/24;B01J20/28;B01J20/30;C07K1/14
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理有限公司 11369
• 代理人: 祁云珊

1.一種小粒徑瓊脂糖羧基磁珠的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

制備有機相：

在攪拌狀態下，將Span-80溶解至液體石蠟中加熱制備有機相；

制備水相：

配制瓊脂糖水溶液，并在攪拌加熱狀態下加入四氧化三鐵懸濁液，制備水相；

制備小粒徑瓊脂糖磁珠：

在攪拌狀態下，將水相滴加入有機相中，其中，所述攪拌狀態下的攪拌速度為500-600rpm，所述滴加時的滴加速度為3-5滴/s，所述有機相的溫度為80-85℃；

滴加完成后繼續反應，之后自然降溫，最后冰浴降溫，制得小粒徑瓊脂糖磁珠；

環氧基交聯反應：

將清洗后的所述的小粒徑瓊脂糖磁珠加入蒸餾水中，并加入氨水及氫氧化鈉溶液，攪拌，然后向所述氨水及氫氧化鈉溶液中加入環氧氯丙烷和DMSO的混合溶液，并開始反應，反應結束后清洗制得富集有環氧基的小粒徑瓊脂糖環氧磁珠；

羧基化反應：

將對氨基苯磺酸溶解至碳酸鈉水溶液中，調節pH值至10～11，之后加入Magroes-4FF及所述的富集有環氧基的小粒徑瓊脂糖環氧磁珠并開始反應，反應結束后清洗干燥制得表面富集有羧基的小粒徑瓊脂糖羧基磁珠。

2.根據權利要求1所述的小粒徑瓊脂糖羧基磁珠的制備方法，其特征在于，所述制備有機相中攪拌狀態的速度為300-400rpm，Span-80和液體石蠟的質量體積比為1.0-1.5：11.0-12.0，制得的有機相的溫度為80℃。

3.根據權利要求1所述的小粒徑瓊脂糖羧基磁珠的制備方法，其特征在于，所述制備水相中攪拌加熱狀態的條件為攪拌速度為300rpm，攪拌時間為2h，攪拌溫度為90℃。

4.根據權利要求1所述的小粒徑瓊脂糖羧基磁珠的制備方法，其特征在于，所述制備水相中瓊脂糖水溶液的質量百分比為0.07-1％，所述四氧化三鐵懸濁液的溶質為四氧化三鐵粉末，溶劑為吐溫20水溶液，其中，四氧化三鐵粉末和蒸餾水的質量體積比1：20，所述吐溫20在蒸餾水中的體積分數為0.5‰。

5.根據權利要求1所述的小粒徑瓊脂糖羧基磁珠的制備方法，其特征在于，所述制備小粒徑瓊脂糖磁珠中滴加完成后反應的條件為攪拌控溫，其中，所述攪拌速度為800rpm，控溫溫度為85℃，反應時間為1h；自然降溫時控制攪拌速度為250rpm，自然降溫后的溫度為40℃，所述冰浴降溫后的溫度為15℃。

6.根據權利要求1所述的小粒徑瓊脂糖羧基磁珠的制備方法，其特征在于，所述環氧基交聯中蒸餾水的體積為100mL；所述攪拌的攪拌速度為250rpm，攪拌時間為30min。

7.根據權利要求1所述的小粒徑瓊脂糖羧基磁珠的制備方法，其特征在于，所述環氧基交聯反應中氫氧化鈉溶液的物質的量濃度為1M，小粒徑瓊脂糖磁珠和氨水的質量比為1:0.2，氨水和氫氧化鈉溶液的體積比為1:1；環氧氯丙烷和DMSO的混合溶液中環氧氯丙烷和DMSO的體積比為2:5。

8.根據權利要求1所述的小粒徑瓊脂糖羧基磁珠的制備方法，其特征在于，所述環氧基交聯反應及羧基化反應的反應條件為反應溫度為40℃，反應時間為12-24h，反應攪拌速度為250rpm。

9.根據權利要求1所述的小粒徑瓊脂糖羧基磁珠的制備方法，其特征在于，所述羧基化反應中碳酸鈉水溶液的物質的量濃度為0.25M，對氨基苯磺酸和碳酸鈉水溶液的質量體積比為1:200，所述溶解的方式為超聲溶解，所述碳酸鈉水溶液和Magroes-4FF的體積比為20:1。

10.一種如權利要求1-9中任意一項所述的一種小粒徑瓊脂糖羧基磁珠的制備方法所制得的小粒徑瓊脂糖羧基磁珠，其特征在于，所述小粒徑瓊脂糖羧基磁珠的外表面接枝羧基。