[發明專利]一種簡化的歐洲小葉椴組織培養方法

有效

• 申請號: 202110497656.9
• 申請日: 2021-05-08
• 公開（公告）號: CN113057099B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發明（設計）人: 王歡利;湯詩杰;嚴靈君;黃犀;王仲偉;朱珣之;羅會婷
• 申請（專利權）人: 江蘇省中國科學院植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京擎天知識產權代理事務所(普通合伙) 32465
• 代理人: 涂春春

1.一種簡化的歐洲小葉椴組織培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）在春季芽萌動后20-40天采集健壯植株上的帶腋芽萌條，剪去萌條頂部1-2個芽，并去除葉片，保留1cm葉柄，經表面消毒后，截取帶芽莖段，接種于誘導培養基中進行培養，15~20d，獲得不定芽；誘導培養基配方為：MS + 6-BA 1.0mg/L +IBA 0.2 mg/L+蔗糖 30g/L+瓊脂5.8g/L，pH值為5.9；所述的外植體消毒方式為：將采集的莖段在2%-5%的堿性洗潔劑溶液中搖晃浸泡20 min，流水沖洗2h后，在超精工作臺上用75%酒精消毒15s，用質量分數為2%的次氯酸鈉消毒5 min，用無菌水清洗5次，每次8min；

2）將步驟1）獲得的不定芽，截取帶1芽莖段，進行繼代增殖培養；增殖培養基配方為：MS+ 6-BA 0.8mg/L +IBA 0.05 mg/L+NAA 0.05 mg/L +蔗糖 30g/L+瓊脂5.8g/L，pH值為5.9；

3）將步驟2）中長至2.0-3.0cm的不定芽轉入生根培養基中，獲得無菌苗；生根培養基配方為：1/2 MS + IBA 1.0 mg/L+NAA 3.0 mg/L +蔗糖 20g/L+瓊脂6.0 g/L，pH值為6.0；

4）將步驟3）獲得的無菌苗轉入穴盤基質中，在人工溫室中煉苗。

2.根據權利要求1所述的一種簡化的歐洲小葉椴組織培養方法，其特征在于，所述采集的帶腋芽萌條為幼嫩的未木質化莖段，采集植株為歐洲小葉椴以下品種：綠塔、新樂或柯林斯。

3.根據權利要求1所述的一種簡化的歐洲小葉椴組織培養方法，其特征在于，所述步驟2）、3）、4）和5）中，組培間光照時間為10~12h/d，光照強度為1200~1800lx，溫度為24~26℃。

4.根據權利要求1所述的一種簡化的歐洲小葉椴組織培養方法，其特征在于，所述步驟5）中，所述基質為草炭、珍珠巖和蛭石，體積比為2：1：1。

5.根據權利要求1所述的一種簡化的歐洲小葉椴組織培養方法，其特征在于，所述步驟5）中，人工溫室環境條件為：溫度25~28℃，相對濕度80%，光照為遮光率80%的遮陽網遮光處理。