[發(fā)明專利]一種八倍體油菜轉(zhuǎn)基因方法以及在基因編輯中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110496645.9
• 申請日: 2021-05-07
• 公開（公告）號: CN113151352B
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李超;付紹紅;梅德圣;王會;楊進(jìn);胡瓊;李云;汪文祥;成洪濤;劉佳;孫夢丹;桑世飛;石育欽;胡學(xué)志;郝夢宇
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所;成都市農(nóng)林科學(xué)院;武漢中油大地希望種業(yè)有限公司
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;C12N15/53;C12N15/55;A01H4/00;A01H5/00;A01H5/10;A01H6/20;A01H1/04;A01H1/02;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 李興林

1.一種八倍體油菜轉(zhuǎn)基因方法在遺傳育種方面的應(yīng)用，其特征在于，所述八倍體油菜轉(zhuǎn)基因方法包括以下步驟：

（1）基因編輯載體構(gòu)建；

（2）八倍體油菜種子預(yù)處理及滅菌；

（3）轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌；

（4）遺傳轉(zhuǎn)化八倍體油菜；

所述步驟（1）中基因編輯載體中含有基因編輯功能元件，基因編輯功能元件為CRISPR/Cas9、CRISPR/Cpf1和prime editing中的任一種；

所述步驟（4）中遺傳轉(zhuǎn)化八倍體油菜的步驟如下：

①無菌種植培養(yǎng)八倍體油菜種子；

②將八倍體油菜下胚軸切成小段，并將其轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)完成的農(nóng)桿菌菌液中進(jìn)行侵染試驗(yàn)；

③侵染完成后，對八倍體油菜下胚軸小段進(jìn)行培養(yǎng)；

所述應(yīng)用包括如下步驟：

a.在油菜轉(zhuǎn)基因后代中，鑒定篩選基因編輯元件具有活性的轉(zhuǎn)基因植株，將之作為父本授粉材料；

b.使用父本授粉材料的花粉對母本進(jìn)行授粉，授粉后代鑒定染色體倍性與母本倍性一致的植株；

c.與母本倍性一致的后代，通過分子標(biāo)記、測序、性狀鑒定篩選得到突變體植株；

d.鑒定不含轉(zhuǎn)基因元件的突變體植株。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述步驟a中基因編輯功能元件為CRISPR/Cas9時(shí)，油菜轉(zhuǎn)基因后代中含有基因編輯功能元件CRISPR/Cas9，從陽性轉(zhuǎn)化系中篩選與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ障啾菴as9表達(dá)量升高的轉(zhuǎn)基因系作物授粉父本材料。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述步驟b中的母本為十字花科作物。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述基因編輯功能元件為CRISPR/Cas9時(shí)，設(shè)計(jì)2個(gè)sgRNA靶點(diǎn)，序列分別為：SgRNA1: GACGCCACCATTCCAACAC，SgRNA2:ACTTAGCCTTCAACGTCTC。