[發明專利]一種新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒

有效

• 申請號: 202110496471.6
• 申請日: 2021-05-07
• 公開（公告）號: CN113308569B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 段昆;付雪;高曉慶;施慧玲;韓序;王珺
• 申請（專利權）人: 杭州杰毅生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

1.一種新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

擴增酶：主要包含逆轉錄酶AMV，耐高溫T7 RNA聚合酶和耐高溫RNA酶H；

N擴增緩沖液：主要包含一對新型冠狀病毒N基因擴增引物，dNTP，NTP，ITP，DTT，二甲基亞砜DMSO，氯化鎂，氯化鉀，山梨醇和牛血清白蛋白BSA；

內標擴增緩沖液：一對人18S RNA基因的擴增引物，dNTP，NTP，ITP，DTT，Tris-HCl 二甲基亞砜DMSO，氯化鎂，氯化鉀，山梨醇和牛血清白蛋白BSA；

檢測酶：包含Cas13a，T7 RNA聚合酶和RNA酶抑制劑；

N檢測緩沖液：主要包括新型冠狀病毒的N基因的crDNA，熒光報告探針，NTP，DTT，氯化鈉和氯化鎂；所述N檢測緩沖液中的新型冠狀病毒N基因crDNA序列如SEQ ID NO.9所示，N基因crDNA經過檢測酶在N檢測緩沖液中反應后，產生的N基因crRNA序列如SEQ ID NO.10所示；

SEQ ID NO.9：Taatacgactcactataggggatttagactaccccaaaaacgaaggggactaaaactgatgctgc tcttgctttgctgctgctt；

SEQ ID NO.10：ggauuuagacuaccccaaaaacgaaggggacuaaaacugaugcugcucuugcuuug cugcugcuu；

內標檢測緩沖液，主要包括內標18S rRNA基因的crDNA，熒光報告探針，NTP，DTT，氯化鈉，氯化鎂和聚乙二醇4000；

礦物油；

C-tube，帶有硅膠膜隔層，能在一管中將上下液體試劑分開的反應管；

陽性對照：含有人源細胞和含有新型冠狀病毒N基因片段序列的假病毒的PBS溶液；

陰性對照：含有人源細胞的PBS溶液。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，擴增的新型冠狀病毒N基因的片段序列如SEQ IN NO.1所示；經過擴增酶在N擴增緩沖液中擴增后產物的RNA序列如SEQ ID NO.2所示；試劑盒中擴增的內標基因18S rRNA的片段序列如SEQ ID NO.3所示，經過擴增酶在內標擴增緩沖液中擴增后產物的RNA序列如SEQ ID NO.4所示；

SEQ ID NO.1: ctcttctcgttcctcatcacgtagtcgcaacagttcaagaaattcaactccaggcagcagtagggg aacttctcctgctagaatggctggcaatggcggtgatgctgctcttgctttgctgctgcttgacagattgaaccagcttgagagcaaaatgtct；

SEQ ID NO.2: agacauuuugcucucaagcugguucaaucugucaagcagcagcaaagcaagagcagcaucaccgccauugccagccauucuagcaggagaaguuccccuacugcugccuggaguugaauuucuugaacuguugcgacuacgugaugaggaacgagaagag；

SEQ ID NO.3: gagcggtcggcgtcccccaacttcttagagggacaagtggcgttcagccacccgagattgagcaat aacaggtctgtgatgcccttagatgtccggggctgcacgcgcgctacactgactggctcagcgtgtgcctaccctacgccggcaggcgcgggtaacccgttgaacc；

SEQ ID NO.4: gagcggucggcgucccccaacuucuuagagggacaaguggcguucagccacccgagauugagcaauaacaggucugugaugcccuuagauguccggggcugcacgcgcgcuacacugacuggcucagcgugugccuacccuacgccggcaggcgcggguaAcccguugaacc。