[發(fā)明專利]一種三重信號放大磁弛豫傳感免疫分析方法

有效

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• 申請日: 2021-05-07
• 公開（公告）號: CN113311152B
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發(fā)明（設計）人: 陳翊平;趙彬杰;洪鋒
• 申請（專利權）人: 華中農業(yè)大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/577;C12Q1/6825;C12Q1/682
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 徐紹新

1.一種三重信號放大磁弛豫傳感免疫分析方法，其特征在于包括以下步驟：

1）在酶標板上包被待測物完全抗原并進行封閉；

2）洗滌酶標板后加入待測物溶液和金納米顆粒，室溫下進行免疫反應，所述金納米顆粒上偶聯有待測物單克隆抗體和用于進行雜交鏈反應的引發(fā)鏈DNA，

3）洗滌酶標板后加入生物素修飾的兩個寡聚核苷酸DNA發(fā)夾，室溫下進行雜交鏈反應；

4）洗滌酶標板后加入鏈霉親和素標記的辣根過氧化物酶，室溫下進行生物識別反應；

5）洗滌酶標板后加入鹽酸多巴胺溶液，鹽酸多巴胺在辣根過氧化物酶催化下生成聚多巴胺；

6）洗滌酶標板后加入Fe³⁺溶液，室溫下進行吸附反應；

7）取上清液，用低場核磁共振分析儀測定橫向弛豫時間T₂并對目標物進行定性和定量分析，

所述引發(fā)鏈DNA的核苷酸序列為H₂N-AAAAAAAAAAAAGTCTAGGATTCGGCGTGGGTTAA，所述兩個生物素修飾的寡聚核苷酸DNA發(fā)夾的序列為bio-H1：biotin-TTAACCCACGCCGAATCCTAGACTCAAA；bio-H2：AGTCTAGGATTCGGCGTGGGTTAACACGCCGAATCCTAGACTACTTTG-biotin。

2.如權利要求1所述的三重信號放大磁弛豫傳感免疫分析方法，其特征在于：所述金納米顆粒上偶聯的待測物單克隆抗體量為10-50 μg。

3.如權利要求1所述的三重信號放大磁弛豫傳感免疫分析方法，其特征在于：所述金納米顆粒上偶聯的引發(fā)鏈DNA量為0.1-1 nmol。

4.如權利要求1所述的三重信號放大磁弛豫傳感免疫分析方法，其特征在于：所述生物素修飾的兩個DNA發(fā)夾的濃度為0.1-1 μM。

5.如權利要求1所述的三重信號放大磁弛豫傳感免疫分析方法，其特征在于：所述鹽酸多巴胺溶液的濃度為5-50 mM。

6.如權利要求1所述的三重信號放大磁弛豫傳感免疫分析方法，其特征在于：所述Fe³⁺溶液的濃度為0.1-1 mM。

7.如權利要求1所述的三重信號放大磁弛豫傳感免疫分析方法，其特征在于：所述鏈霉親和素標記的辣根過氧化物酶的稀釋倍數為1：1000-10000。

8.如權利要求1-7任一項所述的三重信號放大磁弛豫傳感免疫分析方法，其特征在于：所述待測物為毒死蜱。