[發(fā)明專(zhuān)利]軟骨細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)方法、及無(wú)血清培養(yǎng)基

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110494081.5
• 申請(qǐng)日: 2015-10-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112980780A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 矢永博子;矢永克
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 再生醫(yī)科學(xué)股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/077
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/077
• 代理公司: 北京華夏博通專(zhuān)利事務(wù)所(普通合伙) 11264
• 代理人: 劉俊;高珊

【解決課題】本發(fā)明提供一種人軟骨細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)方法、無(wú)血清培養(yǎng)基。【解決方案】本發(fā)明提供一種軟骨細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)方法，包括：用蛋白分解酶處理含人軟骨細(xì)胞的組織的酶處理工序；在酶處理工序之后，用前述蛋白分解酶的抑制劑處理前述組織的抑制劑處理工序；以及在抑制劑處理工序之后，用含有卡托吉寧Kartogenin或SAG中的任一者或兩者、以及ITS、FGF2和氫化可的松的無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)前述組織的培養(yǎng)工序。本發(fā)明提供一種用于培養(yǎng)軟骨細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基，含有卡托吉寧或SAG中的任一者或兩者、以及ITS、FGF2和氫化可的松。

本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2016年11月8日、申請(qǐng)?zhí)枮?01580024032.8、發(fā)明名稱(chēng)為“軟骨細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)方法、及無(wú)血清培養(yǎng)基”的申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及在進(jìn)行無(wú)血清培養(yǎng)之前用蛋白分解酶處理細(xì)胞的軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)方法及適用于該方法的無(wú)血清培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

日本特開(kāi)2003-125787號(hào)公報(bào)中，公開(kāi)了軟骨細(xì)胞分化培養(yǎng)中所使用的無(wú)血清培養(yǎng)基及使用了該無(wú)血清培養(yǎng)基的軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)方法。

日本特許第3638614號(hào)公報(bào)中，公開(kāi)了軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基和使用了該培養(yǎng)基的軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)方法。此外，該文獻(xiàn)中公開(kāi)了ITS。

日本特表2002-529071號(hào)公報(bào)中，公開(kāi)了用于軟骨細(xì)胞樣細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基。

日本特表2009-540826號(hào)公報(bào)中，公開(kāi)了一種軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)方法，其為：從關(guān)節(jié)軟骨活檢中單獨(dú)分離原代人軟骨細(xì)胞，用蛋白酶(灰色鏈霉菌)進(jìn)行1小時(shí)的酶消化，然后，用膠原酶進(jìn)行酶消化。該文獻(xiàn)中，為了從軟骨剝離軟骨細(xì)胞而使用膠原酶。若膠原酶過(guò)度作用，則對(duì)細(xì)胞造成損害。因此，如果在膠原酶附著于細(xì)胞的狀態(tài)下進(jìn)行無(wú)血清培養(yǎng)，則除了不能良好地培養(yǎng)軟骨細(xì)胞以外，所得到的軟骨細(xì)胞有時(shí)不能應(yīng)用于移植等。

日本特表2015-522590公報(bào)的段落[0145]中，記載了卡托吉寧即Kartogenin是一種有助于治療骨關(guān)節(jié)炎的小分子。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專(zhuān)利文獻(xiàn)

專(zhuān)利文獻(xiàn)1：日本特開(kāi)2003-125787號(hào)公報(bào)

專(zhuān)利文獻(xiàn)2：日本特許第3638614號(hào)公報(bào)

專(zhuān)利文獻(xiàn)3：日本特表2002-529071號(hào)公報(bào)

專(zhuān)利文獻(xiàn)4：日本特表2009-540826號(hào)公報(bào)

專(zhuān)利文獻(xiàn)5：日本特表2015-522590公報(bào)

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明要解決的問(wèn)題

上述培養(yǎng)方法中，雖然培養(yǎng)了軟骨，但當(dāng)實(shí)際要對(duì)培養(yǎng)的軟骨進(jìn)行移植等時(shí)，有時(shí)不能得到良好的結(jié)果。

在此，本發(fā)明的目的在于提供一種能夠有效地進(jìn)行培養(yǎng)、此外還能夠得到良好的移植結(jié)果的軟骨細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)方法，能夠用于該方法的無(wú)血清培養(yǎng)基。

解決問(wèn)題的方案

本發(fā)明的第一方面涉及用于培養(yǎng)軟骨細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基含有卡托吉寧或者SMO激動(dòng)劑的SAG中的任一者或兩者、以及ITS、FGF2和氫化可的松。

優(yōu)選地，該培養(yǎng)基含有卡托吉寧和SAG這兩者。

優(yōu)選地，該培養(yǎng)基進(jìn)一步含有IGF(胰島素樣生長(zhǎng)因子)。

優(yōu)選地，該培養(yǎng)基進(jìn)一步含有作為培養(yǎng)對(duì)象的軟骨細(xì)胞。

優(yōu)選地，該培養(yǎng)基的優(yōu)選利用方式為包括該培養(yǎng)基、以及抗壞血酸劑和脂肪酸劑的培養(yǎng)基試劑盒，抗壞血酸劑包括抗壞血酸、抗壞血酸的鹽或抗壞血酸的溶劑化物，脂肪酸劑包括脂肪酸、脂肪酸的鹽或脂肪酸的溶劑化物。